[发明专利]一种基于线性质粒载体从基因组文库中靶向克隆目标片段的方法

权利要求书

1.一种基于线性质粒载体从基因组文库中靶向克隆目标片段的方法，其特征在于，包括如下步骤：

在环形质粒上添加tos序列，所得带有tos的环形质粒在进行体外PCR扩增并使用TelN原端粒酶进行线性化的同时，在载体两端引入与目标基因组片段侧翼相同的序列，得到高浓度线性化克隆载体；

将线性化克隆载体与基因组文库进行体外组装，得到组装产物；

在宿主基因中整合入TelN蛋白表达基因盒，得到整合有TelN蛋白的宿主；

将组装产物转入整合有TelN蛋白的宿主中，筛选目标片段；

所述环形质粒为pBAC质粒；

所述tos序列的添加位点为incC元件和sopA元件之间；

所述宿主为大肠杆菌。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述与目标基因组片段侧翼相同的序列的大小为20～100bp。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述基因组文库选自但不限于大肠杆菌基因组文库、酿酒酵母基因组文库或者哺乳动物基因组文库。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述基因组文库的构建方法为：将基因组DNA采用限制性内切酶进行酶切，

或者，使用CRISPR/cas系统酶切基因组DNA。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述限制性内切酶选自但不限于NotI、SbfI、MluI。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述组装所用试剂为 HiFiDNAAssembly MasterMix或Gibson试剂。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其特征在于，所述在载体两端引入与目标基因组片段侧翼相同的序列的同时，还包括在线性化载体两侧添加酶切序列，构建高通量测序BAC文库的步骤。