[发明专利]一种H3亚型犬流感病毒株、灭活疫苗及其制备方法

说明书

本发明公开了一种H3亚型犬流感病毒株、灭活疫苗及其制备方法。所述疫苗是用保藏编号CGMCC NO.20649的H 3亚型犬流感病毒株作为抗原灭活后制备得到。本发明采用SPF鸡胚或MDCK细胞作为载体进行病毒增殖，收集病毒液，灭活，纯化，制备成疫苗。本发明制备得到的H3亚型犬流感病毒灭活疫苗的病毒含量高、稳定性好、安全性高，是一种较为理想的H3亚型犬流感病毒灭活疫苗，具有重要的公共卫生意义。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及病毒株、其疫苗制品及其制备方法，更具体地说涉及一种H3亚型犬流感病毒病毒株、其灭活疫苗及其制备方法。

背景技术

犬流感(Canine influenza,CI)是由正粘病毒科甲型流感病毒属的犬流感病毒(Canine influenza virus,CIV)引起的犬类动物接触性呼吸道传染病。CIV主要分为H3N8和H3N2亚型。H3N8亚型是马流感病毒跨种间传播赛犬，感染宠物犬临床症状轻微或未见明显的临床症状。H3N2亚型CIV感染犬后，犬表现出明显的发热、精神沉郁、咳嗽流鼻汁等明显临床症状，部分犬治疗不及时死亡，或治愈后易发生呼吸道疾病。

H3N2亚型CIV主要通过气溶胶传播，是我国目前主要流行亚型。

2004年，美国佛罗里达州的赛犬第一次暴发CI，研究发现该CIV为H3N8亚型且起源于马流感病毒(Equine influenza virus,EIV)。2007年韩国暴发犬流感疫情，研究分离得到H3N2亚型CIV，该亚型最早于2005年左右从禽类转移至中国犬类，极易在犬之间传播。2009-2010年，在浙江、江苏、北京、辽宁等地也相继分离到了禽源H3N2亚型CIV，且与中国华南及韩国H3N2亚型CIV高度同源。截至2015年，H3N2亚型在中国及韩国等亚洲地区广泛流行。流行趋势表明H3N2亚型犬流感已经成为包括中国在内的亚洲及美国地方性动物传染病。除此之外，H3N2亚型CIV出现仅十多年，就已经出现多起与人流感病毒重配事件。2012及2014年韩国报道了从犬分离的新型CIV毒株由H3N2亚型CIV与H1N1亚型人流感病毒重配而来。

我国对于该病研究比较深入的是华南农业大学李守军课题组，他们在2010年分离到H3N2亚型犬流感病毒，随后又对全基因组测序，NS1基因原核表达、诊断(HA1蛋白间接ELISA、HI-HA、RT-LAMP)、灭活疫苗、基因工程苗、致病性(PB2基因位点突变对小鼠致病性)等进行了深入研究。目前，预防CIV感染最有效的策略是疫苗接种，美国、韩国等犬流感高发国家市面上已有针对该病的疫苗。鉴于此，研发一种新型高效犬流感疫苗具有重要的公共卫生学意义。

由于疫苗评价模型尚未建立，制约着目前疫苗的开发。因此，研制安全有效的犬流感疫苗，控制犬流感的流行，对保障公共卫生安全有重大意义。

发明内容

本发明目的之一是提供一种H3亚型犬流感病毒灭活疫苗；

本发明目的之二是提供所述H3亚型犬流感病毒灭活疫苗的制备方法。

本发明所述病毒毒株命名为H3亚型犬流感病毒HB株，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC.NO.20649；所述病毒属于正黏病毒科(Orthomyxoviridea)A型流感病毒属(Influenza A virus)，是单链负股RNA病毒，有囊膜；所述病毒对环境的抗性和热稳定性都比较差，在56℃的环境中30分钟、65℃～75℃几分钟即可灭活，在4℃只能保存很短的时间，在-20℃冰箱中冻存能保持几个月的活性，但是病毒凝集红细胞的能力可能消失；所述病毒通常可接种于9～11日龄的鸡胚尿囊腔，培养48小时即可收获；或在MDCK细胞培养。

一种H3亚型犬流感病毒灭活疫苗，所述疫苗由所述H3亚型犬流感病毒接种SPF鸡胚或MDCK细胞，收获鸡胚尿囊液或细胞培养上清，灭活，添加佐剂而得。

所述疫苗的制备方法包括如下步骤：