[发明专利]目标物和氧化还原双响应适配体传感器及其制备方法和应用以及鱼腥藻毒素的定量检测方法

说明书

本发明公开了一种目标物和氧化还原双响应适配体传感器及其制备方法和应用以及鱼腥藻毒素的定量检测方法，通过Ag‑S键将DNA S1连接到AgNPs@Ru‑MOF材料上，再将此材料的溶液、DNA S3溶液、DNA S2与二茂铁甲酸混合孵育后的溶液依次修饰到预处理后的GCE电极表面制成适配体传感器，当目标物鱼腥藻毒素存在时，能够触发DNA S3的第二结构，从而导致DNA S1与DNA S2形成银离子可识别的特殊结构，之后随着Hsubgt;2/subgt;Osubgt;2/subgt;的加入，Hsubgt;2/subgt;Osubgt;2/subgt;能够刻蚀银纳米粒子，生成银离子，银离子通过识别切割位点切割DNA S2释放出抑制物二茂铁，诱导电极表面钌的电化学发光，实现对于鱼腥藻毒素的定量检测。

技术领域

本发明属于生物传感器技术领域，涉及一种目标物和氧化还原双响应适配体传感器及其制备方法和应用以及鱼腥藻毒素的定量检测方法，具体涉及一种基于ECL-RET的AgNPs@Ru-MOF探针的目标物和氧化还原双响应适配体传感器及其制备方法和应用以及鱼腥藻毒素的定量检测方法。

背景技术

Anatoxin-a(ATX-a，鱼腥藻毒素)是最小的一种神经毒素(Mol.Wt，165.23Da)，是一种生物碱，会影响乙酰胆碱的正常释放并引起神经肌肉过度兴奋和抽搐，最终导致呼吸受限和窒息。迄今为止，已经报道了许多用于鱼腥藻毒素的分析方法。例如，塞缪尔·哈达德(Samuel P.Haddad)小组使用同位素稀释液相色谱串联质谱法测定鱼腥藻毒素。AzevedoJ’小组开发了一种平台，该平台可通过具有UV和荧光的高效液相色谱法来检测鱼腥藻毒素。然而，它们中的大多数具有耗时，仪器昂贵或需要专业技术人员的缺点，这限制了它们在实践中的应用。

快速，准确，便捷的鱼腥藻毒素检测方法是必不可少的。在过去的几十年中，具有快速响应，高选择性，低检测限，低背景信号等优点的电化学发光(ECL)在生物分析和成像领域受到了广泛的关注。但是，传统的ECL发光体，如鲁米诺和Ru(bpy)₃²⁺，多环芳烃(PAH)可能会泄漏，导致ECL效率低。

依赖金属离子的DNA酶通常具有很高的选择性，并且不影响DNA酶的活性，但它需要特定的金属离子才能裂解底物链。来自金属离子依赖性DNA酶的传感方法可以使信号分子之间的信号差更近或更远从而可以有效避免来自其他因素的干扰，这通常需要靶标和金属离子共存。分析鱼腥藻毒素依赖金属离子依赖的DNAzyme电化学发光的纳米杂交体系的研究较少，现有技术中也没有用来检测鱼腥藻毒素的电化学发光生物传感器。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明提供了一种目标物和氧化还原双响应适配体传感器及其制备方法和应用以及鱼腥藻毒素的定量检测方法。该适配体传感器是基于ECL-RET的AgNPs@Ru-MOF探针构建的，根据本发明的方法构建的适配体传感器，仅利用电致化学发光仪即可实现对于鱼腥藻毒素的定量检测，且操作简单，背景低，灵敏度高，选择性高。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案如下：

一种目标物和氧化还原双响应适配体传感器的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：

(1)将AgNPs@Ru-MOF材料分散在去离子水中制备成AgNPs@Ru-MOF溶液，并将其与DNA S1溶液混合孵育，得到S1-AgNPs@Ru-MOF溶液；

所述DNA S1的基因序列为：

5’-(SH)-C₆-TTTCGCCATCTTTAGGCGTTAACGGGGCAGCGTATAGTGAGC-(NH₂)-3’；

(2)GCE电极抛光处理后，在脱落酸溶液中进行电化学沉积反应得到羧基修饰的ABA/GCE，再将置于EDC和NHS的混合溶液中活化，得到预处理后的GCE电极；