[发明专利]猪瘟病毒与猪流行性腹泻病毒亚单位联合疫苗及其制备方法有效
| 申请号： | 202110624476.2 | 申请日： | 2021-06-04 |
| 公开（公告）号： | CN113318223B | 公开（公告）日： | 2021-12-31 |
| 发明（设计）人： | 余兴龙;丁彦彬;赵墩;罗烨;罗灵芝;郑金;刘江鹰 | 申请（专利权）人： | 湖南兀邦生物科技有限公司;湖南农业大学 |
| 主分类号： | A61K39/215 | 分类号： | A61K39/215;A61K39/12;A61K39/39;A61P31/14;C07K19/00;C12N15/85;C12N15/62 |
| 代理公司： | 长沙正奇专利事务所有限责任公司 43113 | 代理人： | 何为;袁颖华 |
| 地址： | 410000 湖南省长沙市芙蓉区隆*** | 国省代码： | 湖南;43 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 猪瘟 病毒 流行性 腹泻 单位 联合 疫苗 及其 制备 方法 | ||
1.一种猪瘟病毒与猪流行性腹泻病毒亚单位联合疫苗，其特征在于，其包括猪瘟病毒E2蛋白和猪流行性腹泻病毒S1蛋白的融合蛋白，该融合蛋白为E2-S1蛋白，编码该E2-S1蛋白的E2-S1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.如权利要求1所述的猪瘟病毒与猪流行性腹泻病毒亚单位联合疫苗，其特征在于，所述E2-S1基因是分别以猪瘟病毒E2蛋白基因序列、猪流行性腹泻病毒S1蛋白基因序列作为N端序列和C端序列，中间添加GGGGSGGGGS序列的linker，进行重叠延伸PCR扩增得到。
3.如权利要求2所述的猪瘟病毒与猪流行性腹泻病毒亚单位联合疫苗，其特征在于，所述猪瘟病毒E2蛋白基因的扩增引物序列如SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示，猪流行性腹泻病毒S1蛋白基因的扩增引物序列如SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示。
4.如权利要求1所述的猪瘟病毒与猪流行性腹泻病毒亚单位联合疫苗，其特征在于，所述疫苗还包括免疫佐剂。
5.如权利要求4所述的猪瘟病毒与猪流行性腹泻病毒亚单位联合疫苗，其特征在于，所述疫苗中融合蛋白与免疫佐剂的体积比为1：1。
6.如权利要求4所述的猪瘟病毒与猪流行性腹泻病毒亚单位联合疫苗，其特征在于，所述免疫佐剂为ISA201VG佐剂。
7.一种猪瘟病毒与猪流行性腹泻病毒亚单位联合疫苗的制备方法，其特征在于，该方法步骤如下：
A.分别以猪瘟病毒E2蛋白基因序列、猪流行性腹泻病毒S1蛋白基因序列作为N端序列和C端序列，中间添加GGGGSGGGGS序列linker，进行重叠延伸PCR扩增出E2-S1基因，该E2-S1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；
B.将E2-S1基因克隆至载体pKS001的HindⅢ和EcoRⅠ中，构建重组表达载体pKS001-E2-S1；
C.将重组表达载体pKS001-E2-S1转化表达细胞，构建稳定细胞株，表达获得重组融合蛋白E2-S1。
8.如权利要求7所述的猪瘟病毒与猪流行性腹泻病毒亚单位联合疫苗的制备方法，其特征在于，所述方法还包括步骤D：将重组融合蛋白E2-S1与免疫佐剂按体积比1：1混合，制得。
9.如权利要求8所述的猪瘟病毒与猪流行性腹泻病毒亚单位联合疫苗的制备方法，其特征在于，所述免疫佐剂为ISA201VG佐剂。
10.如权利要求7所述的猪瘟病毒与猪流行性腹泻病毒亚单位联合疫苗的制备方法，其特征在于，所述步骤C中的表达细胞株为哺乳动物细胞株CHO-K1Q。
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