[发明专利]猪瘟病毒与猪流行性腹泻病毒亚单位联合疫苗及其制备方法

说明书

一种猪瘟病毒与猪流行性腹泻病毒亚单位联合疫苗，其包括以猪瘟病毒E2蛋白和猪流行性腹泻病毒S1蛋白为基础的融合蛋白E2‑S1，编码该E2‑S1蛋白基因的核苷酸序列如SEQ IDNO.1所示。以纯化的E2‑S1蛋白为免疫抗原制备的E2‑S1亚单位联合疫苗，能够同时保护免疫猪群抵抗CSFV和PEDV感染，为CSFV和PEDV的净化提供有效的技术保障，同时该疫苗具有一针多免及减少猪群免疫应激反应的作用，有广阔的应用前景。

技术领域

本发明属于兽用疫苗和兽用生物制品领域，主要涉及一种基因工程疫苗，具体涉及一种同时防控猪瘟病毒(CSFV)和猪流行性腹泻病毒(PEDV)的新型亚单位联合疫苗，同时涉及该疫苗的制备方法。

背景技术

猪瘟是由猪瘟病毒(CSFV)引起的一种以发热拉稀、肠道发炎为主要症状的急性接触性传染疾病，具有高度传染性和致死性。目前流行地区或国家仍然采用接种弱毒疫苗的方法作为预防猪瘟的主要手段，猪瘟弱毒疫苗免疫的猪群无法与自然感染的猪瘟野毒从免疫学上区分开来，该疫苗无法用于猪场的猪瘟净化，无法用于我国猪瘟根除计划，新型标记疫苗研究迫切需要。猪瘟病毒(CSFV)的囊膜糖蛋白E2，被认为是最具开发成CSFV亚单位疫苗的结构蛋白，该蛋白参与病毒的感染过程，CSFV表面的单抗决定表位决定簇主要是位于E2(690aa-866aa)的A、B、C、D四个结构域中，这四个抗原区，能够诱导机体产生保护性中和抗体，保护机体对抗CSFV的野毒感染，所以E2糖蛋白是CSFV亚单位疫苗开发的首选蛋白。

猪流行性腹泻是由猪流行性腹泻(PEDV)引起的以高接触、仔猪高死亡率的重要传染性疾病，该病的主要特征是感染侵袭新生仔猪消化系统，死亡率可达70％以上，自2013年首次爆发以后，对整个全球的养猪业造成巨大经济损失。目前，猪流行性腹泻(PEDV)的Spike蛋白(纤突蛋白)作为PEDV亚单位疫苗的靶标抗原已经被广泛研究。研究已经证实，Spike蛋白为糖基化蛋白，分为S1和S2结构域，其中S1区域分布丰富的中和抗体表位是PEDV亚单位疫苗开发的理想目标蛋白。

目前，对于上述两个疾病的防控主要是以疫苗的免疫接种为主，防控猪瘟国内主要是以传统的C株活疫苗，防控猪流行性腹泻主要是以传统的减毒活疫苗和灭活疫苗。传统的C株CSFV活疫苗，尽管效果稳定，但已不能满足中国的猪瘟根除净化计划的需求。目前国内商品化的PEDV活疫苗和灭活苗，主要以CV777等毒株进行制备，临床反映仍存在免疫保护效果不好以及散毒、毒株重组突变的风险。

基因工程亚单位疫苗具有安全、有效、便于操作的优点，被认为是最具有应用前景的疫苗类型，开发针出对CSFV和PEDV的亚单位疫苗能更好用于CSFV和PEDV的免疫防控和净化，具有重大意义。国内，对母猪分别进行CSFV和PEDV的多次免疫，提高种猪群CSFV和PEDV抗体水平以及仔猪的CSFV和PEDV的母源抗体，已经成为抵抗猪群感染CSFV和PEDV的主要免疫防控措施之一。目前市面上，已经有单独E2的杆状病毒表达的亚单位疫苗(新疆天康、武汉科前)用于防控CSFV，使用酵母和杆状病毒表达的E2亚单位疫苗研究工作已经开展很多，研究也较为深入。其次针对于PEDV的S1蛋白(Spike蛋白的S1部分)作为亚单位疫苗研究在国内外已经有所进展。但目前国内仍无针对PEDV的商品化亚单位疫苗，也无针对同时防控CSFV和PEDV的亚单位形式联合疫苗。

发明内容

本发明的目的是，针对上述现有技术的不足，提供一种猪瘟病毒与猪流行性腹泻病毒亚单位联合疫苗及其制备方法。

为达上述目的，本发明所采用的技术方案是，一种猪瘟病毒与猪流行性腹泻病毒亚单位联合疫苗，其包括猪瘟病毒E2蛋白和猪流行性腹泻病毒S1蛋白的融合蛋白，该融合蛋白为E2-S1蛋白，编码该E2-S1蛋白的E2-S1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。