[发明专利]一种包含新型冠状病毒突变抗原的中和抗体检测试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种包含新型冠状病毒突变抗原的中和抗体检测试剂盒，其中，所述抗原为修饰型COVID-19Spike RBD重组蛋白，其氨基酸序列为SEQ ID NO:1或与上述序列具有至少80％同源性的序列，所述序列包括野生型新型冠状病毒毒株和突变型新型冠状病毒毒株的检测位点。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，还包括：碱性磷酸酶或辣根过氧化酶标记的修饰型COVID-19Spike RBD重组蛋白；和，偶联磁性颗粒的COVID-19ACE2受体蛋白。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，还包括化学发光底物。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，当试剂盒中包括辣根过氧化物酶标记的修饰型COVID-19Spike RBD重组蛋白时，化学发光底物包括A液和B液；

A液为0.5-1.5g/L鲁米诺，0.05-0.2g/L对碘酚，缓冲液为pH 7.5-9的2-10mmol/LTris-HCl，避光保存；

B液为0.5-1g/L过氧化脲；A液和B液按体积比1:1混合。

当试剂盒中包括碱性磷酸酶标记的修饰型COVID-19Spike RBD重组蛋白时，化学发光底物包括如下组分，0.1-0.5g/L AMPPD，0.05-0.1g/L Na₂SO₃，2-10g/L SDS(十二烷基硫酸钠)，5-10g/L Tris；0.02-0.1mL/L Tween-20和1-3mL Proclin TM 300，pH值为9.0±0.50。

5.根据权利要求2-4所述的试剂盒，所述偶联磁性颗粒的COVID-19ACE2受体蛋白的工作浓度为0.01～0.08μg/mL。

6.根据权利要求2-4所述的试剂盒，所述碱性磷酸酶或辣根过氧化酶标记的修饰型COVID-19Spike RBD重组蛋白的工作浓度为0.1～0.8mg/mL。

7.根据权利要求2所述的试剂盒，其中，辣根过氧化酶标记的修饰型COVID-19SpikeRBD重组蛋白的制备过程包括以下步骤：

1)配制5-10mg/mL HRP溶液；

2)配制10-20mg/mL过碘酸钠NaIO₄溶液；

3)将步骤1)的HRP 100-200μL置于0.01-0.05M pH＝5.2的乙酸盐缓冲液中，2-8℃中透析2-4h；

4)取出透析过的HRP，向其中加入步骤2)中过碘酸钠NaIO₄溶液2-4μL，于室温避光反应30-60min；

5)向上述混合液中加入1-4μL甘油轻轻混匀，以除去过量的过碘酸钠；

6)将步骤5)中的混合液置于0.01-0.05M pH＝5.2乙酸盐缓冲液中，透析4-8h，除去未反应的试剂；

7)更换0.02-0.05M pH＝9.5的碳酸盐缓冲液，2-8℃反应4-8h；并加入修饰型COVID-19Spike RBD重组蛋白，使其浓度达到2-4mg/mL；

8)加入NaBH₄使其终浓度为5-10mM，2-8℃孵育6-18h；

9)完成的标记液用0.01-0.05M PBS于2-8℃透析20-24h，加入等体积甘油，-20℃保存。