[发明专利]一种包含新型冠状病毒突变抗原的中和抗体检测试剂盒及其应用

说明书

本公开提供一种包含新型冠状病毒突变抗原的中和抗体检测试剂盒及其应用，其中的抗原为修饰型COVID‑19Spike RBD重组蛋白，其氨基酸序列为SEQ ID NO:1或与上述序列具有至少80％同源性的序列，所述序列包括野生型新型冠状病毒毒株和突变型新型冠状病毒毒株的检测位点。本公开的抗原为在现有的COVID‑19Spike RBD重组蛋白的基础上进行基因设计而成的修饰型COVID‑19Spike RBD重组蛋白，该重组蛋白的氨基酸序列包括野生型新型冠状病毒毒株和突变型新型冠状病毒毒株的检测位点，即同时具备检出野生型与突变型毒株的能力。

技术领域

本公开涉及免疫分析检测技术领域，尤其涉及一种包含新型冠状病毒突变抗原的中和抗体检测试剂盒及其应用。

背景技术

COVID-19在临床上表现为肺炎、发热、咳嗽、肌肉疼痛、腹泻，严重时导致死亡。接种疫苗是预防病毒感染流行的有效手段，SARS-CoV-2与2003年爆发的严重急性呼吸综合征(SARS) 冠状病毒(SARS-CoV)和2012年爆发的中东呼吸综合征(MERS)冠状病毒 (MERS-CoV)同属于冠状病毒科的β-冠状病毒属。由于前期无疫苗、药物等有效防控手段，同时该病毒存在人群普遍易感，传播途径多，难以有效阻断等原因，目前世界各地科学家正在努力快速研发新冠疫苗，并取得可喜进展。

冠状病毒是包膜病毒，主要结构包括单股正链核酸(ssRNA),刺突蛋白 (spikeprotein，S蛋白)、膜蛋白(membrane protein，M蛋白)、包膜蛋白(envelop protein，E蛋白)、核衣壳蛋白(nucelocapsid protein，N蛋白)。其中，S蛋白形成三聚体结构，负责识别并结合宿主细胞表面的受体，在病毒感染的第一步发挥重要作用。M和E蛋白在病毒装配中起重要作用，N蛋白是RNA合成所必需的。SARS-CoV的研究显示，由于SARS-CoV-2与SARS-CoV的基因组高度相似性，其表面S蛋白直接与宿主细胞表面受体血管紧张素转换酶2(angiotensin converting enzyme 2，ACE2)结合进入细胞引起感染，促进病毒感染繁殖及感染。疫苗的有效性就在于诱导机体产生中和抗体，与病毒结构蛋白上的中和抗原表位结合，阻断该表位与敏感细胞的细胞膜上的相应受体结合，从而阻止该病毒入侵敏感细胞，发挥疫苗的保护作用。

冠状病毒的N蛋白是与病毒RNA结合并构成核衣壳的蛋白，在病毒组装和RNA转录中起着至关重要的作用，同时也参与宿主细胞对病毒感染的反应。 SARS的N蛋白可以和患者的血清发生反应，并表达SARS的N蛋白DNA疫苗亦可以诱导小鼠产生抗体反应。但因N蛋白位于病毒颗粒内部，抗体反应可能在抗病毒感染中的作用甚微。

借鉴SARS-CoV和MERS-CoV的研究经验，有效的疫苗接种后应诱导有效的B细胞应答产生抗体，尤其是中和抗体，中和抗体可阻止病毒与细胞受体的结合而阻止病毒进入细胞。此外，根据免疫途径的不同，黏膜途径接种疫苗还可以激活黏膜分泌型IgA抗体，在感染部位直接对抗病毒感染。已经证实， T细胞免疫在SARS-CoV感染的恢复中起重要作用，并且动物实验中也证实疫苗特异性记忆CD4 T细胞对SARS-CoV的感染具有保护作用。因此，有效的新冠疫苗应该同时激发中和抗体及特异性的T细胞应答。