[发明专利]检测小鼠脑梗死体积的试剂盒、其制备方法及检测方法

权利要求书

1.一种检测小鼠脑梗死体积的试剂盒，其特征在于，包括：Na₂HPO₄•12H₂O、KH₂PO₄、NaCl、KCl、ddH₂O和TTC。

2.一种如权利要求1所述的检测小鼠脑梗死体积的试剂盒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1、含钾离子的1x0.01 M PBS的配制：称取3.63g Na₂HPO₄•12H₂O、0.24g KH₂PO₄、8.0gNaCl、0.2g KCl于烧杯中，再使用量筒量取500ml ddH₂O于烧杯中使其溶解，最后再使用量筒量取ddH₂O定容至1000ml，在磁力搅拌器上搅拌均匀；

S2、1% TTC染色液的配制：根据实验需要使用含钾离子的1x0.01 M PBS配制1%的染色液，避光混匀；

S3、2% KH₂PO₄的配制：称取0.2g KH₂PO₄ 烧杯中，加入10ml的含有钾离子的1x0.01 MPBS，Vortex混匀；

S4、染色试剂盒的制备：同时加入上述的使用含钾离子的1x0.01 M PBS配制1%的染色液、2% KH₂PO₄，避光混匀，制成染色试剂盒备用。

3.根据权利要求2所述的检测小鼠脑梗死体积的试剂盒的制备方法，其特征在于，步骤S1中，Na₂HPO₄•12H₂O、KH₂PO₄、NaCl、KCl的质量比为：3.63:0.24:8:0.2。

4.一种检测小鼠脑梗死体积的试剂盒的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

S101、断头法处死动物后迅速取脑，反面置于载玻片粗糙面上，快速转移至-20℃冰箱中；

S102、于-20℃冰箱中冷冻15-20min；

S103、在染色瓶里提前加入6ml试剂盒染色液，避光；

S104、将脑片拿出-20℃，快速使用刀片将小鼠脑切成5块，厚度为2mm；

S105、将切好的5片脑片立马放入装有试剂盒溶液的瓶子中，封口膜封口，37℃避光水浴等待，每30s轻晃动，使其充分染色；

S106、待充分染色均匀时，水浴锅中拿出后，取出脑片，使用PBS溶液洗涤3-5min；

S107、对染色结束的脑片使用4%的PFA进行固定、过夜；

S108、选择图像进行分析，测量每一片的梗死体积，每一层梗死为该层梗死面积，每层梗死体积为该层梗死体积和层厚的成绩，各层的梗死体积即为总的梗死体积；

S109、计算统计，并数据分析。