[发明专利]检测小鼠脑梗死体积的试剂盒、其制备方法及检测方法

说明书

本发明提供一种检测小鼠脑梗死体积的试剂盒，包括：Na₂HPO₄•12H₂O、KH₂PO₄、NaCl、KCl、ddH₂O和TTC。本发明建立了急性缺血性脑卒中的动物模型，通过使用目前存在的TTC染色方法以及我们的试剂盒进行实验，比较在脑缺血再灌注模型组中的小鼠脑梗死体积的染色情况，为脑梗死体积的测量提供一种新思路和理论依据。相对于传统的TTC染色来看，本发明的试剂盒具有染色均匀和染色快速的优势。

技术领域

本发明属于生物医学技术领域，具体涉及一种检测小鼠脑梗死体积的试剂盒、其制备方法及检测方法。

背景技术

脑血管疾病包括出血性出血性脑中风和缺血性脑中风。脑卒中是我国成人死亡第二大病因，其中缺血性脑中风是脑血管疾病的主要类型，约占85%左右。缺血性脑中风、脑血栓、脑栓塞、腔隙性缺血性脑中风和多发性缺血性脑中风及小中风都属于缺血性脑卒中，缺血性脑卒中又叫缺血性脑梗死，是指脑血管狭窄或闭塞，导致脑血流阻断而使脑组织发生缺血缺氧、软化甚至坏死，致使脑血管功能障碍，引起相关症状。动脉粥样硬化是基础，缺血性脑中风存活的患者面临的最大的问题是再发作（五年内的平均复发率高达40%以上）和其他缺血性事件的发生。

由于临床研究的限制，动物脑缺血模型被广泛应用于脑梗死的研究损伤机制及防治措施。TTC（2,3,5—氯化三苯基四氮唑）染色是缺血性脑卒中实验研究的常用方法。TTC（2,3,5—氯化三苯基四氮唑）是脂溶性光敏感复合物，1894年用于合成用来检测种子的生存能力，1958年开始用来染色检测哺乳动物组织的缺血梗塞。它是呼吸链中吡啶—核苷结构酶系统的质子受体，与正常组织中的脱氢酶反应而呈红色，而缺血组织内脱氢酶活性下降，不能反应，故不会产生变化呈苍白。

TTC染色是TTC和活细胞线粒体内的琥珀酸脱氢酶反应，生成红色的甲臜，用来表示细胞的活力。配制多为2%，染色要避光，37℃条件下，它是评价脑缺血损伤常用的指标。虽然目前的TTC染色方法较为普遍，但在这一领域还有很多的细节性技术需要研究人员去填补，比如存在染色时间较长、染色不均匀的现象。因此，急需获得一种染色快速并染色均匀且精准的试剂盒，从而在实验研究中通过对脑梗死体积进行精准快速的检测，实现有效快速计算脑梗死体积，进一步实现实验研究的快速精确的进展。

目前基础研究的TTC染色的技术手段存在染色不均匀、对比度不高、梗死边界不清晰等现象，这就意味着研究人员在脑统计梗死体积时可能会存在不精确的问题。再者，现有的TTC染色技术还存在染色时间较长的问题，一般染色时间为15-30分钟不等，大大浪费了科研人员的时间与精力。因此，急需要一种染色快速、精确并染色均匀的测量脑梗死体积的试剂盒，通过应用此试剂盒与实验技术，大大节约研究人员的时间与精力，实现有效测量脑梗死体积的技术手段，进一步实现测量脑卒中脑梗死体积的精准医疗。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种能快速检测小鼠脑梗死体积的试剂盒、其制备方法及检测方法，在检测脑梗死体积的技术与方法中更加快速、精确并染色均匀的测量脑梗死体积，为目前所存在的TTC染色提供进一步的改善与指导方案。

为解决上述技术问题，本发明的实施例提供一种检测小鼠脑梗死体积的试剂盒，包括：Na₂HPO₄•12H₂O、KH₂PO₄、NaCl、KCl、ddH₂O和TTC。

本发明还提供一种检测小鼠脑梗死体积的试剂盒的制备方法，包括如下步骤：