[发明专利]包含猪繁殖与呼吸综合症ORF5基因的重组5型腺病毒载体及其制备方法和应用有效
| 申请号： | 202110625669.X | 申请日： | 2021-06-04 |
| 公开（公告）号： | CN113234760B | 公开（公告）日： | 2022-12-02 |
| 发明（设计）人： | 张大生 | 申请（专利权）人： | 长沙爱科博生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/861 | 分类号： | C12N15/861;C12N15/62;A61K39/12;A61P31/14 |
| 代理公司： | 北京细软智谷知识产权代理有限责任公司 11471 | 代理人： | 刘静荣 |
| 地址： | 410000 湖南省长沙市雨花区环保*** | 国省代码： | 湖南;43 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 包含 繁殖 呼吸 综合症 orf5 基因 重组 病毒 载体 及其 制备 方法 应用 | ||
1.包含猪繁殖与呼吸综合症ORF5基因的重组5型腺病毒载体，其特征在于，所述腺病毒载体共表达猪繁殖与呼吸综合症ORF5基因和猪CTLA4基因；猪繁殖与呼吸综合症ORF5基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；
猪CTLA4基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；
猪繁殖与呼吸综合症ORF5基因与猪CTLA4基因通过GGGGSGGGGSGGGGS蛋白基因连接。
2.权利要求1所述的包含猪繁殖与呼吸综合症ORF5基因的重组5型腺病毒载体的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
(1)将猪繁殖与呼吸综合症ORF5基因和猪CTLA4基因克隆到腺病毒穿梭载体质粒上，获得重组穿梭质粒；
(2)重组穿梭质粒与腺病毒骨架载体进行体外重组，得到重组腺病毒；
(3)包装重组腺病毒后，转染细胞。
3.根据权利要求2所述的包含猪繁殖与呼吸综合症ORF5基因的重组5型腺病毒载体的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述腺病毒穿梭载体质粒为PEC3.1(+)。
4.根据权利要求2所述的包含猪繁殖与呼吸综合症ORF5基因的重组5型腺病毒载体的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，腺病毒骨架载体为pAd-PL-DEST。
5.根据权利要求2所述的包含猪繁殖与呼吸综合症ORF5基因的重组5型腺病毒载体的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，重组腺病毒穿梭载体质粒通过重组臂attL1和重组臂attL2与腺病毒骨架载体pAd/PL-Dest上的重组臂体外重组，得到重组5型腺病毒pAd-CTLA4-ORF5。
6.根据权利要求2所述的包含猪繁殖与呼吸综合症ORF5基因的重组5型腺病毒载体的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，转染的细胞为293T细胞或猪的肺泡巨噬细胞。
7.权利要求1所述的包含猪繁殖与呼吸综合症ORF5基因的重组5型腺病毒载体在制备猪繁殖与呼吸综合症疫苗中的应用。
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