[发明专利]包含猪繁殖与呼吸综合症ORF5基因的重组5型腺病毒载体及其制备方法和应用

说明书

本发明涉生物科技领域，具体涉及包含猪繁殖与呼吸综合症ORF5基因的重组5型腺病毒载体及其制备方法和应用。本发明包含猪繁殖与呼吸综合症病毒ORF5基因的重组5型腺病毒载体，共表达猪繁殖与呼吸综合症病毒ORF5基因和猪CTLA4基因。试验表明，融合CTLA4基因的重组腺病毒载体rAd‑CTLA4‑ORF5，仅需要一次注射就能和进口疫苗免疫两次一样，刺激机体产生特异性的体液免疫和细胞免疫应答。本发明的重组腺病毒载体rAd‑CTLA4‑ORF5可以作为预防和治疗繁殖与呼吸综合征病毒的疫苗或者药物。

技术领域

本发明涉生物科技领域，具体涉及包含猪繁殖与呼吸综合症ORF5基因的重组5型腺病毒载体及其制备方法和应用。

背景技术

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS，蓝耳病)的病原体为动脉炎病毒属的成员，是一种有囊膜的单股正链RNA病毒，病毒粒子呈球型，直径为55～60纳米。病毒有2个血清型，即美洲型和欧洲型，我国分离到的毒株为美洲型。病毒对酸、碱都较敏感，尤其很不耐碱，一般的消毒剂对其都有作用，但在空气中可以保持3周左右的感染力。猪繁殖与呼吸综合征的主要感染途径为呼吸道，空气传播、接触传播、精液传播和垂直传播为主要的传播方式，病猪、带毒猪和患病母猪所产的仔猪以及被污染的环境、用具都是重要的传染源。

剖检猪繁殖与呼吸综合征病死猪，主要眼观病变是肺弥漫性间质性肺炎，并伴有细胞浸润和卡他性肺炎区，肺水肿，在腹膜以及肾周围脂肪、肠系膜淋巴结、皮下脂肪和肌肉等处发生水肿。在显微镜下观察，可见鼻黏膜上皮细胞变性，纤毛上皮消失，支气管上皮细胞变性，肺泡壁增厚，膈有巨噬细胞和淋巴细胞浸润。母猪可见脑内灶性血管炎，脑髓质可见单核淋巴细胞性血管套，动脉周围淋巴鞘的淋巴细胞减少，细胞核破裂和空泡化。

一般情况下，种猪接种灭活苗，而育肥猪接种弱毒苗。因为母猪若在妊娠期后三分之一的时间接种活苗，疫苗病毒会通过胎盘感染胎儿；而公猪接种活苗后，可能通过精液传播疫苗病毒。考虑到蓝耳病灭活苗产生的抗体水平比较低，经典毒株的弱毒苗免疫对高致病性蓝耳病的保护力有限，而高致病性蓝耳病疫苗的使用具有很大的风险性。因此，有效的基因工程疫苗对保护蓝耳病具有重要的意义。

GP5蛋白是蓝耳病ORF5基因编码的一个糖基化的囊膜蛋白，具有较好的免疫原性，能够诱导产生中和抗体。因此，GP5蛋白在蓝耳病的致病性、诊断、预防与控制等方面研究中具有重要意义，是研制基因工程疫苗的最佳候选基因。

腺病毒是无包膜的线性双链DNA病毒，在自然界分布广泛，至少存在100种以上的血清型。其基因组长约36kb，两端各有一个反向末端重复区(ITR)，ITR内侧为病毒包装信号。基因组上分布着4个早期转录元(E1、E2、E3、E4)承担调节功能，以及一个晚期转录元负责结构蛋白的编码。早期基因E2产物是晚期基因表达的反式因子和复制必须因子，早期基因E1A、E1B产物还为E2等早期基因表达所必须。因此，E1区的缺失可造成病毒在复制阶段的流产。E3为复制非必须区，其缺失则可以大大地扩大插入容量。

发明内容

本发明的目的在于提供一种包含猪繁殖与呼吸综合症ORF5基因的重组5型腺病毒载体。

本发明的再一目的在于提供上述重组5型腺病毒载体的制备方法。

本发明的再一目的在于提供上述重组5型腺病毒载体的应用。

根据本发明具体实施方式的包含猪繁殖与呼吸综合症ORF5基因的重组5型腺病毒载体，所述腺病毒载体共表达猪繁殖与呼吸综合症ORF5基因和猪CTLA4基因。

根据本发明具体实施方式的包含猪繁殖与呼吸综合症ORF5基因的重组5型腺病毒载体，猪繁殖与呼吸综合症ORF5基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

SEQ ID NO.1: