[发明专利]一种测定噬菌体对抗生素敏感性的方法

权利要求书

1.一种噬菌体对抗生素敏感性的评价方法，其特征在于，包括：

步骤1：将噬菌体接种至含抗生素的生理盐水中，培养0～72h，分别取0h、24h、48h、72h的培养液，得待测样液；

步骤2：将噬菌体接种至不加抗生素的生理盐水中，培养0～72h，分别取0h、24h、48h、72h的培养液，得对照样液；

步骤3：按照步骤(1)～(3)测定待测样液和对照样液中噬菌体的效价，比较同一培养时间下待测样液和对照样液的噬菌体效价，判定噬菌体对所述抗生素的敏感性高低：

(1)向玻璃平板中加入第一培养基，凝固，得下层平板；

(2)将病原菌接种至第二培养基中，培养至OD₆₀₀＝0.8～1.3，获得病原菌培养液；取第三培养基，加入所述病原菌培养液和与所述病原菌培养液等体积的马血清，迅速、均匀地加入到步骤(1)的下层平板上，凝固，得双层平板；

(3)取待测样液和对照样液，分别稀释，取稀释液分别按照双层平板法测定噬菌体的效价；

所述步骤(2)中，病原菌培养液的加入量V以μL计，每8ml第三培养基中所述病原菌培养液的加入量V由以下公式计算得到：

560＝病原菌菌液OD₆₀₀×V。

2.根据权利要求1所述的评价方法，其特征在于，所述待测样液中，噬菌体浓度为7～15亿PFU/ml。

3.根据权利要求1所述的评价方法，其特征在于，所述培养为37℃、100～140rpm恒温振荡培养。

4.根据权利要求1所述的评价方法，其特征在于，所述病原菌为巴氏杆菌；所述抗生素为硫酸庆大霉素、恩诺沙星、阿莫西林中的至少一种。

5.根据权利要求1所述的评价方法，其特征在于，步骤(2)中，所述第一培养基与第三培养基的体积比为20:8；所述第一培养基为TSA培养基；所述第二培养基为5％马血清的TSB培养基；所述第三培养基为TSA+TSB培养基。

6.根据权利要求1所述的评价方法，其特征在于，所述第三培养基中，TSA培养基与TSB培养基的质量比为25：15。

7.根据权利要求1所述的评价方法，其特征在于，步骤(3)中，所述稀释倍数为10²、10³、10⁴、10⁵、10⁶、10⁷倍。

8.根据权利要求1所述的评价方法，其特征在于，所述双层平板法具体为：在双层平板背面画九宫格，在每小格右下角标选定的注稀释倍数，每个梯度设置两个重复；取各梯度稀释样液10μl加入对应小格内，超净台内晾干；将晾干的平板倒置放在37℃恒温培养箱内静置培养8～10h；选取可清晰计数空斑的梯度方格统计噬菌斑个数，获得噬菌体的效价。

9.根据权利要求1所述的评价方法，其特征在于，步骤3中，比较72h待测样液和对照样液的噬菌体效价，判定噬菌体对所述抗生素的敏感性高低。

10.根据权利要求1所述的评价方法，所述判定方法为：若相同培养时间下待测样液和对照样液的噬菌体效价存在数量级差异，则判定该噬菌体对该抗生素敏感性较高；反之，则判定所述噬菌体对所述抗生素不敏感。