[发明专利]一种稳定、灵敏的髓过氧化物酶检测试剂盒

说明书

本发明涉及生化检测技术领域，具体涉及一种稳定、灵敏的髓过氧化物酶检测试剂盒。所述检测试剂盒包括试剂R1、R2，试剂R1中含有缓冲液、氯化锂、D‑艾杜糖、赤藓糖醇、PEG‑10000、三异丙醇胺聚氧丙烯聚氧乙烯醚、防腐剂；试剂R2中含有缓冲液、D‑艾杜糖、赤藓糖醇、三异丙醇胺聚氧丙烯聚氧乙烯醚、羧基化三氧化二铁磁性纳米颗粒、83nm的兔抗人髓过氧化物酶抗体包被胶乳颗粒、185nm的兔抗人髓过氧化物酶抗体包被胶乳颗粒、防腐剂。本发明可以有效检测髓过氧化物酶的含量，具有灵敏度高、稳定性好、线性范围宽等优点。

技术领域

本发明属于生化检测技术领域，具体涉及一种稳定、灵敏的髓过氧化物酶检测试剂盒。

背景技术

髓过氧化物酶(myeloperoxidase，MPO)是血红素辅基的血红素蛋白酶，是血红素过氧化物酶超家族成员之一，存在于髓系细胞(主要是中性粒细胞和单核细胞)的嗜苯胺蓝颗粒中，是髓细胞的特异性标志。随着对MPO研究的深入，人们发现MPO基因多态性导致个体对一些疾病易感性的差异，与人类多种疾病的发生、发展密切相关，因此越来越受到国内外学者的重视。

MPO以3种亚型存在于髓系细胞中，分别为MPOⅠ、Ⅱ、Ⅲ。3种亚型主要是重链有差异，轻链的差异较小，导致它们在相对分子质量及疏水性等方面不同，3种亚型在功能上的差异还不明确，有待进一步研究。

目前，测定髓过氧化物酶常用的方法有流式细胞仪测定法、ELISA法、连续监测法等。其中流式细胞仪测定法的技术程序比较复杂，需使用特殊仪器；ELISA法，操作繁琐，灵敏度低，检测结果多为定性；连续监测法，操作简单、使用方便，但灵敏度和稳定性较差，线性范围比较窄。

发明内容

为解决上述问题，本发明提供一种稳定、灵敏的髓过氧化物酶检测试剂盒。该试剂盒可以有效检测髓过氧化物酶的含量，具有灵敏度高、稳定性好、线性范围宽等优点。

为解决上述技术问题，本发明提供技术方案如下：

一种稳定、灵敏的髓过氧化物酶检测试剂盒，包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1的成分和含量为：

所述试剂R2的成分和含量为：

进一步的，所述试剂R1、R2的缓冲液为25℃、pH为6-8的DIPSO缓冲液。

进一步的，所述防腐剂为o-邻伞花烃-5-醇。

进一步的，所述兔抗人髓过氧化物酶抗体包被胶乳颗粒的制备步骤如下：

步骤1：各取1mg粒径为83nm的羧基胶乳颗粒和185nm的羧基胶乳颗粒，分别加入MOPS-HCL缓冲液，振荡混匀，然后离心，弃上清，再分别加入MOPS-HCL缓冲液超声重悬，得到83nm羧基胶乳颗粒缓冲体系和185nm羧基胶乳颗粒缓冲体系；

步骤2：于步骤1得到的83nm羧基胶乳颗粒缓冲体系和185nm羧基胶乳颗粒缓冲体系中分别加入EDC和NHS，并补充MOPS-HCL缓冲液至5mL，于一定温度及转速下振荡反应一段时间，进行活化；

步骤3：活化结束后，离心，去上清，分别加入MOPS-HCL缓冲液进行超声重悬，重复一次，之后加入PIPES超声重悬，待用；

步骤4：在步骤3所得液体中分别加入髓过氧化物酶抗体，混匀，于恒温振荡箱反应；

步骤5：反应结束后，加入BSA，于2-8℃封闭一段时间；

步骤6：离心，弃上清，所得沉淀即为83nm兔抗人髓过氧化物酶抗体包被胶乳颗粒和185nm兔抗人髓过氧化物酶抗体包被胶乳颗粒。