[发明专利]一种同时检测猪肉中磺胺类、氟苯尼考、替米考星和甲氧苄啶的快速检测试剂盒

说明书

本发明提供了一种同时检测猪肉中磺胺、氟苯尼考、替米考星和甲氧苄啶的快速检测试剂盒，属于兽药残留分析和检测技术领域。本发明提供的试剂盒能够同时高效且准确的检测猪肉中是否含有磺胺类、氟苯尼考、替米考星、甲氧苄啶，并且有效地解决了ELISA反应时间较长以及胶体金灵敏度不高的问题。

技术领域

本发明属于兽药残留分析和检测技术领域，尤其涉及一种同时检测猪肉中磺胺类、氟苯尼考、替米考星和甲氧苄啶的快速检测试剂盒。

背景技术

随着我国社会经济的发展和城乡居民收入的不断增加，人民的生活水平有了很大的提高。目前，我国人民的猪肉人均消费量已经达到国际平均水平。但是在猪肉产品产量大幅度增长的同时，兽药、饲料添加剂、非法添加物等有害物质等食品安全问题也越来越成为社会广泛关注的焦点和热点。

目前，国内现有的针对磺胺、氟苯尼考、替米考星和甲氧苄啶兽药残留的检测方法主要是仪器分析方法、酶联吸附免疫分析法(ELISA)和胶体金免疫层析法。但是，这些传统的方法存在着样品量要求多，检测时间长等缺点，因此无法满足生猪入厂前对兽药残留的监控。

发明内容

本发明的目的在于提供一种同时检测猪肉中磺胺类、氟苯尼考、替米考星和甲氧苄啶的快速检测试剂盒。

为实现上述目的，本发明提供了一种同时检测猪肉中磺胺、氟苯尼考、替米考星和甲氧苄啶的快速检测试剂盒，所述试剂盒包括如下组分：反应液A，反应液B，阴性对照液，浓缩清洗剂，显色剂A，显色剂B，停止剂，预混孔板，反应孔板。

优选地，所述反应液A为磺胺、氟苯尼考、替米考星、甲氧苄啶单克隆抗体混合工作液；

优选地，所述混合工作液由反应液A稀释液稀释得到；

每1000ml所述反应液A稀释液的配方为：100ml 0.5M EDTA，900ml 0.02M 硼酸盐缓冲液，0.05％环糊精，0.05％酪蛋白钠，0.10％Triton X-100，0.05％叠氮钠，0.10％海藻糖，0.05％聚乙二醇，0.05％聚丙烯酰胺，0.05％乳清蛋白。

优选地，所述混合工作液中磺胺、氟苯尼考、替米考星、甲氧苄啶单克隆抗体的稀释倍数为：磺胺1/25W、氟苯尼考1/8W、替米考星1/6.8W、甲氧苄啶1/30W。

优选地，所述氟苯尼考单克隆抗体的抗原制备方法如下：

A.半抗原合成

(1)称取500mg氟苯尼考原药，加入6ml吡啶，搅拌至全部溶解，加入 153mg HS，加热到60度，通过TLC发现反应没有变化时，旋干吡啶，用甲醇溶解，加入硅胶进行拌样，旋干样品进行柱层析，收集所需要的溶液，旋干，得450.2mg氟苯尼考半抗原；

B.免疫原制备

(1)将17.08mg氟苯尼考半抗原用1.5ml DMF溶解，加入25.75mg EDC， 15.46mgNHS溶解，室温搅拌活化2-3h，得到氟苯尼考免疫原反应液；

(2)称取50mg BSA溶于3.5ml 0.1M碳酸氢钠溶液中充分溶解，冰浴降温至0-4℃搅拌，将氟苯尼考免疫原反应液逐滴加入，搅拌反应24h；

(3)将步骤(2)反应产物装入透析袋，2L 0.01M PBS，4℃搅拌透析3d，将透析产物离心得到氟苯尼考免疫原；

C.包被原制备

(1)将17.08mg氟苯尼考半抗原用1.5ml DMF溶解，加入25.75mg EDC， 15.46mgNHS溶解，室温搅拌活化2-3h，得到氟苯尼考包被原反应液；

(2)称取33.6mg OVA溶于3.5ml 0.1M碳酸氢钠溶液中，使其充分溶解，冰浴降温至0-4℃搅拌，将氟苯尼考包被原反应液逐滴加入，搅拌反应24h；