[发明专利]一种荧光探针及其制备方法

权利要求书

1.一种荧光探针的制备方法，其特征在于，所述荧光探针的化学式如下所示：

所述荧光探针的制备方法包括如下步骤：

(1)对化合物Ⅰ，在碱作用下，使之形成内环，得到化合物Ⅱ，具体反应如式Ⅰ所示；

(2)将化合物Ⅱ与2-氯间二苯酚进行反应，得到化合物Ⅲ，具体反应式如式Ⅱ所示；

(3)在酸作用下，使化合物Ⅲ中的羟基消除，得到化合物Ⅳ，具体反应如式Ⅲ所示；

2.根据权利要求1所述的一种荧光探针的制备方法，其特征在于，化合物Ⅰ通过如下方法进行合成：

将2-(1，2-二氢吡啶基)乙酰氯(后称化合物Ⅵ)与2-卤代甲酰丙二酸二乙酯(后称化合物Ⅶ)进行反应，制备得到化合物Ⅴ，再将化合物Ⅴ与2-氯苯酚进行酰基化反应，得到化合物Ⅰ，具体反应如式Ⅳ和式Ⅴ所示：

其中，X为氯或溴。

3.根据权利要求2所述的一种荧光探针的制备方法，其特征在于，化合物Ⅰ的合成具体包括如下步骤：

S1、将化合物Ⅶ以10～100mM的浓度溶解于溶剂Ⅰ中，并加入碱Ⅰ，保持混合均匀，随后在5～20min内向其中分批投入化合物Ⅵ，充分反应后得到混合体系Ⅰ；

S2、向上述混合体系Ⅰ中，加入酸Ⅰ调节至酸性，继续加入2-氯苯酚，充分反应后，得到混合体系Ⅱ；

所述溶剂Ⅰ为非芳香族非质子溶剂，所述碱Ⅰ为可溶于溶剂Ⅰ的有机碱；所述碱Ⅰ的用量为化合物Ⅶ物质的量的3～10倍，步骤S1反应温度为20～40℃，所述化合物Ⅵ与化合物Ⅶ的物质的量之比为1∶(1～1.1)，所述酸Ⅰ为三氟乙酸或三氟甲酸，所述2-氯苯酚与化合物Ⅵ的物质的量之比为(1.05～1)∶1，步骤S2反应温度为20～80℃，且不高于溶剂Ⅰ的沸点。

4.根据权利要求3所述的一种荧光探针的制备方法，其特征在于，所述溶剂Ⅰ为二氯甲烷、三氯甲烷、四氯化碳中的一种，或二氯甲烷、三氯甲烷和四氯化碳以任意比例形成的混合溶液。

5.根据权利要求3所述的一种荧光探针的制备方法，其特征在于，在步骤S2后，还包括步骤S3，对混合体系Ⅱ进行分离处理，具体如下：

S3、对混合体系Ⅱ，除去溶剂后，对产物进行柱层析处理，分离得到化合物Ⅰ，柱层析所用固定相为100～500目氧化铝，柱层析所用流动相为含有0～1％质量分数的甲醇的二氯甲烷。

6.根据权利要求1所述的一种荧光探针的制备方法，其特征在于，对于式Ⅰ～Ⅲ，具体采用如下步骤进行合成：

S4、将化合物Ⅰ溶解于溶剂Ⅱ中，加入碱Ⅱ，在10～45℃的温度下反应充分，随后加入酸Ⅱ，调节pH至酸性，升温至60～100℃，但不超过溶剂Ⅱ的沸点，继续充分反应，得到混合体系Ⅲ；

S5、对混合体系Ⅲ进行分离，得到化合物Ⅱ；

S6、将化合物Ⅱ溶解于酸液Ⅰ中，混合均匀后，继续加入2-氯间二苯酚，加热至60～100℃，充分反应，得到混合体系Ⅳ；

S7、对混合体系Ⅳ进行进一步分离，得到目标产物；

其中，所述溶剂Ⅱ为二氯甲烷、三氯甲烷、乙腈、二氯乙烷、苯、甲苯、乙苯、对二甲苯、间二甲苯、邻二甲苯、间三甲苯中的任意一种，或任意数种形成的混合体系；

所述碱Ⅱ为氨，二甲胺、二乙胺、三甲胺、三乙胺中的任意一种；

所述酸Ⅱ为三氟乙酸、三氯乙酸、三氟甲基磺酸中的一种；

所述酸液Ⅰ为三氟甲基磺酸、三氟乙酸、三氯乙酸、磷酸、高氯酸中任意一种，溶解于乙醇、乙腈、丙醇、正丁醇、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、二甲亚砜中的任意种，形成的均相混合体系。

7.根据权利要求6所述的一种荧光探针的制备方法，其特征在于，在步骤S6中，在酸液Ⅰ中，酸的用量为化合物Ⅰ的物质的量的2～10倍。

8.根据权利要求6所述的一种荧光探针的制备方法，其特征在于，在步骤S7中，具体步骤如下：将混合体系Ⅵ蒸干，随后在乙酸乙酯和/或乙醚体系中进行重结晶，保留滤渣，用水淋洗，烘干后，得到目标产物。

9.根据权利要求6所述的一种荧光探针的制备方法，其特征在于，在步骤S4中，所述碱Ⅱ的物质的量与化合物Ⅰ的物质的量之比为(0.6～1)∶1。