[发明专利]一种富含乳双歧杆菌发酵饲料的生产方法

说明书

本发明属于生物饲料领域，具体涉及一种富含乳双歧杆菌发酵饲料的生产方法；步骤为：活化菌株，得到枯草芽孢杆菌、酿酒酵母、乳双歧杆菌、凝结芽孢杆菌和副干酪乳杆菌发酵种子液；豆粕与豆渣、次粉混合得到发酵培养基，在密封条件下进行厌氧发酵后获得成品；本发明采用混菌厌氧发酵模式，利用枯草芽孢杆菌、酿酒酵母和凝结芽孢杆菌消耗发酵初期环境中的残余氧气，副干酪乳杆菌产酸丰富，为乳双歧杆菌提供适宜生长的环境pH，通过菌株间的共生协同作用，提高菌体密度，发酵彻底，乳双歧杆菌菌量高，有机酸含量丰富，适口性好，经济效益高；本发明利用qPCR方法检测发酵饲料中乳双歧杆菌的数量，检测时间短、灵敏度高。

技术领域

本发明属于生物饲料领域，具体涉及一种富含乳双歧杆菌发酵饲料的生产方法。

背景技术

双歧杆菌是厌氧益生菌，是动物肠道菌群的重要组成部分，可以分解糖类，产生醋酸、乳酸等酸类；双歧杆菌通过细胞壁中的磷壁酸与肠黏膜上皮细胞特异性结合，黏附在肠黏膜表面，形成生物菌膜，起到占位保护作用，具有稳定肠道内环境、抵御有害菌感染，促进消化等功能。双歧杆菌可以较好地利用豆粕中的水苏糖，降解原料中抗营养因子。然而，双歧杆菌比其他细菌更易受氧气、pH值、储藏温度等因素的影响，发酵基质中不同菌株的存在也会影响双歧杆菌生长，如微生物代谢产生的抑菌物质以及菌株对底物营养的竞争利用或菌株间的拮抗作用，都可能抑制双歧杆菌的生长；当发酵基质中存在与双歧杆菌具有共生或协同作用的微生物时，则会促进双歧杆菌的生长。双歧杆菌即使在牛奶中也需要较长的发酵条件和严格的厌氧条件。因此，双歧杆菌多以微生物制剂形式应用于养殖行业，在发酵饲料中的应用受到限制。凝结芽孢杆菌是兼性厌氧菌，具有芽孢杆菌和乳酸菌的双重特性，在有氧、微氧和无氧环境下均可以进行代谢反应，弥补了枯草芽孢杆菌在微氧、无氧条件的下代谢变缓、产酶量降低的不足。凝结芽孢杆菌通过EMP途径发酵葡萄糖，通过磷酸戊糖途径发酵木糖，具有较高的乳酸产量。凝结芽孢杆菌是芽孢产生菌，与其他乳酸菌相比，其在热处理和低温贮藏过程中具有更好的抗逆性和稳定性。此外，凝结芽孢杆菌还能提高蛋白酶和淀粉酶的活性。

目前已有一些研究将双歧杆菌应用于饲料发酵，如专利CN 103981123A，其采用豆粕、麸皮和玉米粉作为发酵原料，利用植物乳杆菌和乳双歧杆菌进行分段发酵，但是工艺复杂且增加污染风险。专利CN 103421710A将干酪乳杆菌、植物乳杆菌、动物双歧杆菌进行混合固态发酵，发酵后pH值较高，为5.10，而只有当pH低于4.5时，才能有效抑制病原菌生长，因此缩短了保存期。此两个公开发明专利均未添加枯草芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、酵母菌等产消化酶丰富的菌株，底物代谢不彻底，同时由于发酵环境中可能存在残留氧气，缺失好氧菌会影响厌氧环境营造，抑制双歧杆菌的生长，降低发酵质量。现有研究报道没有检测发酵饲料中双歧杆菌的菌量变化。

发明内容

本发明的目的在于提供一种利用枯草芽孢杆菌、酿酒酵母、副干酪乳杆菌、凝结芽孢杆菌和乳双歧杆菌进行一步厌氧固态发酵豆粕、豆渣和次粉，从而制备一种富含乳双歧杆菌的发酵饲料，所述发酵饲料发酵彻底，有机酸含量高，具有酸香味，含有乳双歧杆菌菌量高，适口性好，饲料利用率高；同时操作简单，生产成本低，具有较高经济价值。

为了实现以上目的，本发明采用的技术方案具体如下：

(1)将枯草芽孢杆菌、酿酒酵母、乳双歧杆菌和乳酸菌分别接种到相应的液体培养基中进行活化培养，分别得到枯草芽孢杆菌发酵种子液、酿酒酵母发酵种子液、乳双歧杆菌发酵种子液和乳酸菌发酵种子液；

(2)将豆粕、豆渣和次粉混合均匀，得到厌氧发酵培养基：

(3)接种步骤(1)得到的枯草芽孢杆菌发酵种子液、酿酒酵母发酵种子液、乳双歧杆菌发酵种子液和乳酸菌发酵种子液分别加入步骤(2)得到的厌氧发酵培养基中，混合均匀，得到厌氧发酵混合物，调整发酵温度以及培养基含水量，在密封条件下进行厌氧发酵，厌氧发酵后获得成品，即为富含乳双歧杆菌发酵饲料；