[发明专利]融合蛋白及其制备方法、应用、表达系统和疫苗

权利要求书

1.一种融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白包括假单胞杆菌外毒素A结构域区段、猪圆环病毒2型Cap蛋白优势抗原表位区段、猪圆环病毒3型Cap蛋白优势抗原表位区段和羧基末端部分；

其中，所述猪圆环病毒2型Cap蛋白优势抗原表位区段由SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列表达，所述猪圆环病毒3型Cap蛋白优势抗原表位区段由SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列表达。

2.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白包括假单胞杆菌外毒素A结构域包括假单胞杆菌外毒素A结构域Ⅰ和假单胞杆菌外毒素A结构域Ⅱ；

优选地，所述假单胞杆菌外毒素A结构域区段由SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列表达。

3.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述羧基末端部分由包括SEQ IDNO.4所示的核苷酸序列的核苷酸序列表达；

优选地，所述羧基末端部分由SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5或SEQ ID NO.6所示的核苷酸序列表达。

4.根据权利要求1-3任一项所述的融合蛋白，其特征在于，所述假单胞杆菌外毒素A结构域区段、猪圆环病毒2型Cap蛋白优势抗原表位区段、猪圆环病毒3型Cap蛋白优势抗原表位区段和羧基末端部分的排列顺序为PEA-PCV2 Cap-PCV3 Cap-羧基末端，通过柔性氨基酸连接；

优选地，所述柔性氨基酸具有如SEQ ID NO.7所示的氨基酸序列。

更优选地，在所述假单胞杆菌外毒素A结构域区段和所述猪圆环病毒2型Cap蛋白优势抗原表位区段之间还包括补体蛋白C3d；

进一步优选地，所述补体蛋白C3d由SEQ ID NO.8所示的核苷酸序列表达。

5.一种权利要求1-4任一项所述的融合蛋白的制备方法，其特征在于，将编码所述融合蛋白的基因在宿主中表达。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，使用哺乳动物表达系统表达编码所述融合蛋白的基因；

优选地，使用CHO细胞表达系统表达编码所述融合蛋白的基因；

优选地，提供包含编码所述融合蛋白的基因的表达载体，将所述表达载体导入CHO细胞中，然后对CHO细胞进行筛选，得到稳定表达所述融合蛋白的CHO细胞株，所述CHO细胞株表达得到所述融合蛋白；

优选地，所述制备方法中还包括将稳定表达所述融合蛋白的CHO细胞驯化为悬浮培养的步骤。

7.一种能够表达权利要求1-4任一项所述融合蛋白的蛋白表达系统。

8.如权利要求1-4任一项所述的融合蛋白或权利要求5或6所述的制备方法制备得到的融合蛋白在如下(A)-(D)任一项中的应用：

A)制备猪圆环病毒疫苗；

B)制备猪圆环病毒的抗体；

C)制备检测猪圆环病毒的试剂盒；

D)制备猪圆环病毒诊断抗原。

9.一种含有权利要求1-4任一项所述的融合蛋白的疫苗。

10.根据权利要求9所述的疫苗，其特征在于，所述疫苗中的融合蛋白的浓度为10-100μg/ml，优选为20-80μg/ml，更优选为50μg/ml；

优选地，所述疫苗还包括辅料，所述辅料包括疫苗佐剂、稳定剂和抗生素中的至少一种；

优选地，所述疫苗佐剂包括氢氧化铝胶、弗氏完全佐剂、弗氏不完全佐剂、白油佐剂、MF59佐剂或ISA201R VG，优选使用ISA201R VG。