[发明专利]融合蛋白及其制备方法、应用、表达系统和疫苗

说明书

本发明提供了一种融合蛋白及其制备方法、应用、表达系统和疫苗，涉及生物技术领域，本发明提供的融合蛋白，包括假单胞杆菌外毒素A结构域区段、猪圆环病毒2型Cap蛋白优势抗原表位区段、猪圆环病毒3型Cap蛋白优势抗原表位区段和羧基末端部分。本发明通过筛选出PCV2和PCV3Cap蛋白的优势抗原表位，其抗原性好，易高表达，然后将各优势表位与PEA部分功能性片段融合，同时在融合蛋白C端加入了羧基末端序列以及增强免疫原性，增加了融合蛋白的可溶性。得到的融合蛋白具有靶向定位，抗原性好，表达量高的优点。将该融合蛋白作为抗原制备疫苗具有安全性好，效价稳定，无毒副作用，激活细胞免疫应答的优势。

本申请是申请日为2018年09月19日，申请号为201811104817.8，发明名称为“融合蛋白及其制备方法、应用、表达系统和疫苗”的分案申请。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其是涉及一种融合蛋白及其制备方法、应用、表达系统和疫苗。

背景技术

猪圆环病毒(Porcinecircovirus,PCV)属于圆环病毒科，单链、环状DNA病毒。主要分为无致病性的猪圆环病毒型(PCV1)和致病性的猪圆环病毒型(PCV2)。目前已知，Cap蛋白是PCV的结构蛋白，具有良好的免疫原性。2016年10月，美国Kansas州立大学的R.Palinski和加州大学SanFrancisco分校T.G.Phan等均报道一个新的PCV基因型，即称为PCV3。该病毒从发病母猪或仔猪中分离得到，同时PCV2检测为阴性。基因组序列分析发现，PCV3基因组包含2000个碱基，具有与PCVl和PCV2相似的基因组结构，主要编码cap和rep两个基因。猪圆环病毒型3在我国的猪场病例中被检测到，从流产母猪及发生皮炎肾病的小猪上发现大量的病毒数量，而且与猪圆环病毒型同时感染发病，引起较大的危害。

PCV相关的疾病(PCVassociateddiseases,PCVAD)包括断奶仔猪多系统衰竭综合征(postweaningmultisystemicwastingsyndrome,PMWS)、猪皮炎肾病综合征(porcinedermatitisandnephropathysyndrome,PDNS)、呼吸系统疾病(respiratorydisease)、繁殖障碍(reproductivefailure)和肠道疾病(entericdisease)等。特别是断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的主要病原，导致猪群免疫抑制，给养猪业造成了巨大的经济损失。

猪圆环病毒感染造成淋巴细胞的减少和淋巴细胞亚群比例失衡，造成免疫抑制。PCV主要在淋巴组织中增殖，感染可造成淋巴细胞衰竭、淋巴细胞凋亡。树突状细胞(Dendriticcells；DCs)在机体天然免疫和获得性免疫中都具有重要的作用。Vincent等发现80％的树突状细胞可与PCV相互作用，PCV可在树突状细胞中长期存在并维持感染性，但不会导致树突状细胞的病变和死亡，这是一种逃避DCs降解作用的新途径，也为病毒逃避免疫提出了一种新的机制。

PCV感染后淋巴细胞产生抗体的能力下降，细胞免疫力下降，肺泡巨噬细胞对病原的吞噬和清除能力也下降，抑制性T细胞的活动增强，导致机体抗病力下降，从而使其他病原体更容易侵入，可继发感染猪繁殖与呼吸综合征、支原体等，从而导致多种疫苗接种失败。

猪圆环病毒全病毒灭活疫苗和亚单位疫苗在机体的体液免疫方面发挥着一定的作用，但对于猪圆环病毒这种以细胞免疫为主的病原，如何通过细胞免疫来清除病毒是从根本上进行疾病预防的方向。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的第一个目的在于提供一种融合蛋白，以至少缓解现有技术中存在的技术问题之一。

本发明的另一个目的在于提供一种上述融合蛋白答制备方法，该制备方法可以实现大量表达高质量的上述融合蛋白。

本发明的另一个目的在于提供一种能够表达上述融合蛋白的蛋白表达系统，可以直接快速大量得到上述融合蛋白。