[发明专利]一种基于离子液体涂层的FLM-EKS-CZE在线富集测定有机酸含量的方法

说明书

本发明公开了一种基于离子液体涂层的FLM‑EKS‑CZE在线富集测定有机酸含量的方法，所述的有机酸为香草酸、丹参素钠、阿魏酸，本发明在离子液体修饰涂层毛细管柱的基础上将自由液膜与电动增压在线富集技术相结合，毛细管经离子液体涂层修饰后，电渗流方向被逆转，化学稳定性好，对目标分析物的分离效果好，此外，在后续的FLM‑EKS‑CZE两步在线富集方法中，FLM‑FESI堆积和t‑ITP堆积的发生进一步提高了对目标分析物的富集效率，本发明方法重现性良好、分析时间短、灵敏度较高，检测限低，富集倍数高达2000倍以上，符合绿色化学的要求，适用于中药等复杂样品基质中有机酸含量的测定。

技术领域

本发明涉及毛细管电泳分析领域，尤其涉及一种基于离子液体涂层的FLM-EKS-CZE(自由液膜-电动增压-毛细管区带电泳模式)在线富集测定有机酸的方法。

背景技术

有机酸，即含羧基(–COOH)的酸性化合物，广泛存在于植物的叶、花、茎等各部位。我国天然有机酸资源丰富，在中药中已经发现了较多种类和数量的有机酸类成分，且具有重要的生物活性，如抗氧化、抗癌、抗炎和预防心血管疾病等。然而，中药化学成分复杂，结构类型繁多，含量低微，传统的分析方法往往耗时耗力耗财。因此，寻求快速、高效、简便的分析方法，对高效分析测定中药中有机酸类成分而言具有重要意义。

常用的有机酸检测分析技术主要是高效液相色谱法和气相色谱法等，但上述经典方法存在分析时间过长、溶剂消耗量大等缺点。与之相比，毛细管电泳分析技术(capillaryelectrophoresis，CE)分析速度快、操作简便、有机溶剂消耗少、分离模式多样，但低灵敏度限制了该方法在复杂基质痕量组分测定中的应用。为了提高CE检测灵敏度，获得更佳的富集效果，多种在线富集技术的联用为研究者们提供了新的研究思路。

电动增压(EKS)在线富集技术，结合了场放大进样堆积(FESI)和瞬时等速电泳(t-ITP)两步在线堆积技术，并因上千万倍的检测灵敏度及良好的分离效果而备受研究者们的关注。FESI，是利用电泳和电渗的合力使待测物质在电场作用下进入毛细管内以实现堆积，一般是将待测物质溶解在低电导的溶液中，通过电场力作用使待测物质在界面处堆积，电迁移速率越快的待测物质堆积效果越好。等速电泳(Isotachophoresis，ITP)属于毛细管电泳类型之一，通常用于生物样品中蛋白质、核酸等物质的分离，其原理是根据样本内各组分在毛细管中的淌度不同而逐渐形成各自独立的电泳区带，并在区带内富集聚焦，直至依次流出流路另一端，从而实现分离。

Kuban于2014年提出将不与水混溶的有机溶剂塞与微电膜萃取(μ-EME)相结合，并命名为“自由液膜(FLM)”(Kuban P，Bocek P.Micro-electromembrane extraction acrossfree liquid membranes.Instrumentation and basic principles[J].J.Chromatogr.A,2014,1346:25-33)。FLM作为含水供体和受体溶液之间的选择性相界面，具有促进带电物质在透明管中电诱导转移的作用。2017年，Chui团队首次将FLM运用于EKS方法中，从而进一步提高CE的灵敏度，并将提出的FLM-EKS-CZE技术成功应用于环境水样中的百草枯和敌草快的分析(Chui M Q,Thang L Y,See H H.Integration of the free liquid membraneinto electrokinetic supercharging-capillary electrophoresis for thedetermination of cationic herbicides in environmental water samples[J].J.Chromatogr.A,2016,1481:145-151.)。