[发明专利]一种基于MSPD联用EKS-CZE测定石蒜科生物碱含量的方法

权利要求书

1.一种基于MSPD离线预浓缩联用EKS-CZE在线富集测定石蒜科生物碱含量的方法，其特征在于，所述的石蒜科生物碱为盐酸石蒜碱和/或氢溴酸加兰他敏；

所述方法包括如下步骤：

（1）MSPD提取待测样品中的石蒜科生物碱

将待测样品研磨成粉末状，与吸附剂混合，研磨粉碎后获得混合粉末，将混合粉末转移至固相萃取柱内，用洗脱剂加压洗脱，将所得洗脱液离心并取上清液，挥干溶剂得到提取物；

（2）EKS-CZE在线富集测定石蒜科生物碱含量

对毛细管进行预处理，基于EKS-CZE进行电泳分析得到提取物中石蒜科生物碱的峰面积，将峰面积代入到相应的标准曲线中得到待测样品中石蒜科生物碱含量；

所述的电泳分析条件为：以20~60 mM磷酸二氢钠和5~25 mM羟丙基-β-环糊精作为背景缓冲液；先40~60 mbar压力注入前导电解质溶液，再电压+8~12 kV注入样品溶液，最后40~60 mbar压力注入后导电解质溶液，分离电压为+20~30 kV，温度为20~30 ºC，检测波长为205 nm；

步骤（1）中，所述的吸附剂为SBA-15分子筛、ZSM-5分子筛、氟罗里硅土、硅胶或氧化铝；

步骤（1）中，所述的洗脱剂为甲醇、乙腈、无水乙醇、乙酸乙酯或丙酮；

步骤（2）中，所述的前导电解质溶液为氯化钾溶液，浓度为15~25 mM，注入时间为20~40s；

步骤（2）中，所述的后导电解质溶液为十二烷基三甲基氯化铵溶液或十六烷基三甲基溴化铵溶液，浓度为10~20 mM，注入时间为35~45 s。

2.根据权利要求1所述的基于MSPD离线预浓缩联用EKS-CZE在线富集测定石蒜科生物碱含量的方法，其特征在于，步骤（1）中，所述的待测样品与吸附剂以质量比1:2.5~3.5混合。

3.根据权利要求1所述的基于MSPD离线预浓缩联用EKS-CZE在线富集测定石蒜科生物碱含量的方法，其特征在于，步骤（1）中，所述的研磨粉碎时间为140~160 s。

4.根据权利要求1所述的基于MSPD离线预浓缩联用EKS-CZE在线富集测定石蒜科生物碱含量的方法，其特征在于，步骤（1）中，所述的待测样品与洗脱剂的质量体积比为1mg：45~55µL。

5.根据权利要求1所述的基于MSPD离线预浓缩联用EKS-CZE在线富集测定石蒜科生物碱含量的方法，其特征在于，步骤（2）中，所述的样品溶液进样时间为30~90 s。

6.根据权利要求1所述的基于MSPD离线预浓缩联用EKS-CZE在线富集测定石蒜科生物碱含量的方法，其特征在于，步骤（2）中，所述的标准曲线建立方法为:将浓度均为0.01~0.50 µg/mL的盐酸石蒜碱和氢溴酸加兰他敏的混合标准溶液利用EKS-CZE在线富集后进行检测，再以毛细管电泳谱图中的峰面积为纵坐标，以浓度为横坐标分别绘制盐酸石蒜碱和氢溴酸加兰他敏的标准曲线。