[发明专利]一种基于MSPD联用EKS-CZE测定石蒜科生物碱含量的方法

说明书

本发明公开了一种基于MSPD离线预浓缩联用EKS‑CZE在线富集测定石蒜科生物碱含量的方法，所述的石蒜科生物碱为盐酸石蒜碱、氢溴酸加兰他敏。本发明将MSPD技术和EKS‑CZE在线富集技术结合，MSPD方法中，吸附剂与待测样品的目标分析物吸附结合，使目标分析物从复杂基质中分离出来，然后洗脱得到含有目标分析物的洗脱液，洗脱液随后采用EKS‑CZE在线富集模式进行分离检测。本发明方法操作简单、绿色环保，显著提高了毛细管电泳分析的检测灵敏度，重现性好，富集倍数可达1250‑1500倍，符合绿色化学的要求，为复杂基质中微量成分的测定提供了新思路。

技术领域

本发明涉及毛细管电泳分析领域，尤其涉及一种基于MSPD(基质固相分散萃取)离线预浓缩联用EKS-CZE(电动增压-毛细管区带电泳模式) 在线富集测定石蒜科生物碱含量的方法。

背景技术

石蒜碱是石蒜科植物石蒜(Lycoris radiata(L.Herit.)Herb.)鳞茎的主要活性成分之一，已被证明具有抗疟剂、抗肿瘤、抗病毒、抗真菌等多种生物活性。在石蒜科生物碱中，加兰他敏这一类苄基苯乙胺类生物碱，具有选择性抑制乙酰胆碱酯酶和调节烟碱型乙酰胆碱受体的双重功能，并被用于治疗轻中度阿尔茨海默症。

目前，对于石蒜中相关生物碱成分的测定与分析的研究较少，较常见的检测分析技术主要是液相色谱法，而经典的高效液相色谱法存在分析时间长、样品及溶剂消耗量大等不足之处。相比之下，毛细管电泳检测技术 (CE)可应用于微量样品组分的高效测定，且溶剂消耗少，更加绿色环保，在中药等复杂基质的微量组分检测方面独具优势。但中药等样品的成分复杂，经传统提取方法所得到的目标物成分含量较低。因此，为了增强 CE对复杂样品中微量活性物质检测的灵敏度，除了采取多步CE在线富集方法的堆叠外，还可以与其他新型的离线样品预浓缩技术相结合。

EKS，由Hirokawa等首次提出，是一种将场放大进样堆积(FESI)和瞬时等速电泳(t-ITP)两步在线堆积相结合的简单但功能强大的在线样品富集方法(Hirokawa T,Okamoto H,Ga B.High-sensitive capillary zone electrophoresis analysis byelectrokinetic injection with transient isotachophoretic preconcentration:Electrokinetic supercharging[J].Electrophoresis,2010, 24(3):498-504.)。现如今，该技术已主要应用于食品添加剂、环境中农药残留以及非甾体抗炎药的检测分析，研究证明该技术可以使分析响应的灵敏度提高几个数量级，但其并未在中药有效成分分析领域被过多研究，因此，EKS在中药中微量生物碱成分分析方面具有明显优势。

MSPD是由Barker于1989年推出的一种比固相萃取(SPE)更简便的工艺(Barker,Long S A,Short A R,et al.Isolation of drug residues from tissues by solidphase dispersion[J].Journal of Chromatography A,1989, 475(2):353-361.)，主要应用于固体、半固体或粘性液体样品的前处理步骤。该技术集前处理步骤中的提取与净化于一体，避免了样品损失，与SPE相比省去了溶剂萃取环节，大大减少了溶剂消耗量并提高了前处理效率，现已在中药有效成分、农药残留和天然产物活性物质测定中被广泛应用。

公开号为CN110160856A的中国专利文献公开了一种基于 FASS-MCDS(场放大样品堆积-胶束溶剂堆积技术)在线富集测定生物碱含量的方法，测定的生物碱为苦参碱和氧化苦参碱，将待测样品预处理后利用FASS-MCDS两步在线富集后进行检测，再结合建立的苦参碱和氧化苦参碱的标准曲线得到样品中苦参碱和氧化苦参碱的含量。该发明操作简便、分析时间短、且需用到有机溶剂，但目标分析物的富集倍数相对较低，为169～218倍。