[发明专利]基于Fe3+

说明书

本发明公开了一种基于Fe³⁺猝灭上转换荧光的金黄色葡萄球菌快速检测方法，包括以下步骤：将介孔二氧化硅上转换纳米材料溶液与Fe²⁺溶液混合，然后加入金黄色葡萄球菌适配体，构建检测体系；利用不同浓度的金黄色葡萄球菌构建标准液，利用所述检测体系测定不同浓度的金黄色葡萄球菌的荧光强度，绘制标准曲线；所述检测体系中加入过氧化氢，使得Fe²⁺氧化成Fe³⁺导致上转换荧光淬灭，然后测定待测样品中荧光淬灭程度，利用所述标准曲线获取待测样品中金黄色葡萄球菌的含量。本发明提出了一种基于Fe³⁺猝灭上转换荧光的金黄色葡萄球菌快速检测方法，克服传统方法的不足，提高金黄色葡萄球菌检测的灵敏度和准确性。

技术领域

本发明涉及微生物检测领域，特别是涉及一种基于Fe³⁺猝灭上转换荧光的金黄色葡萄球菌快速检测方法。

背景技术

随着我国大众生活水平不断提高，消费观念也发生了改变，对食物的追求从“吃饱”逐渐转变对“吃好”的追求。消费者对食品营养、安全和质量提出了更高的要求。

食源性致病菌可以在不同的环境中生存和分散，导致传染病的爆发，严重威胁公共卫生。其中金黄色葡萄球菌是最常见的食源性致病菌。金黄色葡萄球菌不仅本身具有危害，引起许多疾病，如败血症、心内膜炎、皮肤或全身性感染等。而且，被金黄色葡萄球菌污染的食物迅速腐烂分泌多种肠毒素，相对于菌体本身更难察觉、破坏和去除，导致人类食物中毒，对食品安全和人类健康构成更大威胁。

传统的平板计数法需要经历一个长时间的扩大培养、分离培育和生化鉴定等复杂步骤，不能立即应对突发公共卫生事件和食物中毒事件。目前用于减少金黄色葡萄球菌检测时间的先进方法主要包括实时多重聚合酶链反应、酶联免疫法和环介导等温扩增等。虽然这些技术具有较高的灵敏度和有效性，但也存在一些固有的缺陷，如昂贵的实验室设施、复杂的预处理程序和对训练有素的工作人员的需求，不利于开展现场检测和在实际应用中推广。

具有反斯托克斯过程的镧系掺杂上转换纳米粒子在多个低能近红外光子的激发下能发出可见光。上转换纳米材料依据自身独特的发光机制以及优异的光学性能，对于新型生物传感器的构建发挥着重要作用。第一，制备后的上转换纳米材料本身无毒无害、不受酸碱、温度等外界环境影响、不易光漂白，化学性质以及光学性能稳定；第二，980nm激光激发的上转换荧光可以区别于被测物体本身可能存在的下转换荧光，有效避免背景荧光的干扰，提高传感器的灵敏度。凭借这些优势，上转换荧光技术越来越受到关注。因此，基于现有技术中食源性致病菌检测方法的缺陷，以及上转换荧光技术的优势，提供一种新的食源性致病菌检测方法非常必要。

发明内容

本发明的目的是提供一种基于Fe³⁺猝灭上转换荧光的金黄色葡萄球菌快速检测方法，以解决上述现有技术存在的问题，通过构建稳态特异性金黄色葡萄球菌检测体系，实现高灵敏度、高特异性的快速检测金黄色葡萄球菌。

为实现上述目的，本发明提供了如下方案：

本发明提供一种基于Fe³⁺猝灭上转换荧光的金黄色葡萄球菌快速检测方法，包括以下步骤：

将介孔二氧化硅上转换纳米材料溶液与Fe²⁺溶液混合，然后加入金黄色葡萄球菌适配体，构建检测体系；

利用不同浓度的金黄色葡萄球菌构建标准液，利用所述检测体系测定不同浓度的金黄色葡萄球菌的荧光强度，绘制标准曲线；

所述检测体系中，加入过氧化氢，使得Fe²⁺氧化成Fe³⁺导致上转换荧光淬灭，然后测定待测样品中荧光淬灭程度，利用所述标准曲线获取待测样品中金黄色葡萄球菌的含量。

优选的是，所述检测体系的构建具体包括以下步骤：