[发明专利]一株海洋放线菌及其应用

说明书

本发明属于海洋放线菌资源开发与利用领域，具体涉及一株海洋放线菌及其应用。该海洋放线菌为变异链霉菌（streptomyces variabilis）HN42，于2020年1月25日于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号:CGMCC No.21736。本发明提供的筛选出的海洋变异链霉菌HN42抗肿瘤活性好，菌株海洋变异链霉菌HN42对于宫颈癌hela细胞具有明显的抑制作用，抑菌效果显著，具有广阔的应用前景。本发明筛选出的菌株海洋变异链霉菌HN42具有旺盛的生长能力，可大批发酵应用于多个领域。

技术领域

本发明属于海洋放线菌资源开发与利用领域，具体涉及一株海洋放线菌及其应用。

背景技术

恶性肿瘤是全世界一个主要的致死病种，据世界卫生组织报道，2012年全世界因恶性肿瘤死亡的人次达820万，预计恶性肿瘤病例将持续迅猛增长，将逐年递增至2025年1900万人，2035年达2400万人。肿瘤严重威胁人类生命健康，而现有大多化学药物在治疗疾病的同时，不仅仅杀伤肿瘤细胞，正常细胞也收到严重的伤害，从而使患者产生了严重的不良反应。因此，寻求一类高效、低毒的抗肿瘤药物迫在眉睫，将有助于提高用药安全性和有效性。

海洋环境具有高盐度、高压、低温和寡营养等不同于陆地环境的特点，孕育了富饶的生物资源。海洋生物在新陈代谢、生存方式、信息传递和适应机制等方面具有显著的特点。而作为海洋物种多样性关键组成部分的海洋微生物，在长期的生物进化过程中也产生了与陆生生物不同的基因多样性和代谢多样性，提高了海洋微生物产生结构新颖且活性良好的药物先导化合物的几率。其中，作为海洋微生物重要成员之一的海洋放线菌能产生种类多样且活性独特的次级代谢产物，一直被认为是海洋来源天然产物的重要生产者。海洋放线能够产生与陆地微生物不同的代谢途径和机体防御机制，这对发现新型药物先导化合物、研究药物作用新机理、新靶点等具有重要的意义。

发明内容

本发明提供了一种海洋放线菌。

本发明还提供了该海洋放线菌的筛选方法和应用。

本发明的目的是通过如下技术方案实现的：

本发明提供了一株海洋放线菌，所述海洋放线菌为变异链霉菌（streptomycesvariabilis）HN42，于2020年1月25日于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号: CGMCC No. 21736。

本发明还提供了一种海洋放线菌的筛选方法，包括以下步骤：

（1）将土壤样品室温下放置14~21 d进行风干，将土壤样品用无菌生理盐水进行系列稀释，浓度分别为10^-1~10^-3，不同浓度稀释液分别取100 μL涂布于高氏一号培养基中；

（2）将采用高氏一号培养基对筛选出的放线菌进行分离纯化，纯化出的放线菌-80℃保存。

进一步的，所述高氏一号培养基中加入重铬酸钾及萘啶酮酸，终浓度分别为75 μg/mL及25 μg/mL，28℃培养14~28 d。

本发明还提供了一种利用上述海洋放线菌提取抗肿瘤活性物质的方法，包括以下步骤：

a 将海洋放线菌HN42接种于液体豆饼粉培养基，摇床培养，得到种子液；

b 将步骤（1）中的种子液接种于豆饼粉固体培养基中，培养7天，将培养基切成碎块用提取液进行提取；

c 将步骤（2）收集的提取物采用乙酸乙酯相与ddH₂O萃取至水相无色，得到乙酸乙酯相，萃取后将乙酸乙酯相旋蒸后溶95%甲醇用石油醚进行萃取，萃取后甲醇相旋蒸得到抗肿瘤活性物质。