[发明专利]一种间充质干细胞无血清培养基

说明书

本发明属于生物医药领域，涉及一种间充质干细胞无血清培养基。本发明提供的无血清培养基成分包括基础培养基和添加成分，所述添加成分包括JNK通路抑制剂、ERK1/2通路抑制剂、P38MAPK通路抑制剂和氨基乙醇，所述的JNK通路抑制剂包括但不限于SP600125，ERK1/2通路抑制剂包括但不限于PD0325901，P38MAPK通路抑制剂包括SB202190、SB203580和BIRB796中的至少一种。本发明间充质干细胞的培养基，不含有FBS，无异源动物源性成分，降低细胞污染的几率，同时对MSC的扩增起到促进作用。

技术领域

本发明属于生物医药领域，涉及一种间充质干细胞无血清培养基。

背景技术

干细胞根据分化能力的不同可以分为全能干细胞、多能干细胞、祖细胞等，而根据来源不同又可以分为胎盘干细胞、脂肪干细胞、造血干细胞等。间充质干细胞(MSC,mesenchymal stem cells)是干细胞家族的重要成员，来源于发育早期的中胚层，属于多能干细胞，MSC最初在骨髓中发现，因其具有多向分化潜能、造血支持和促进干细胞植入、免疫调控和自我复制等特点而日益受到人们的关注。如间充质干细胞在体内或体外特定的诱导条件下，可分化为脂肪、骨、软骨、肌肉、肌腱、韧带、神经、肝、心肌、内皮等多种组织细胞，连续传代培养和冷冻保存后仍具有多向分化潜能，可作为理想的种子细胞用于衰老和病变引起的组织器官损伤修复。目前间充质干细胞临床应用于解决多种血液系统疾病，心血管疾病，肝硬化，神经系统疾病，膝关节半月板部分切除损伤修复，自身免疫性疾病等方面取得了重大突破，挽救了更多病患的生命。此外，间充质干细胞在神经系统修复及更多方面具有长远的发展前景。

虽然目前动物实验及部分临床研究发现MSC对于促进组织修复、调节异常免疫反应具有较好的治疗效果，但是MSC应用中仍有诸多问题没有解决:首先体外大规模扩增是实现MSC临床治疗的前提，但是目前MSC的体外扩增体系尚没有达成一致：根据培养基种类的不同，MSC扩增体系可以分为含有胎牛血清的培养体系和成分明确的、无动物源性成分、不含血清的培养体系。

基于胎牛血清的培养体系目前被证明是MSC细胞最有效的培养体系，在此体系下MSC细胞呈现出优良的增值能力、分化能力，具有良好的临床治疗潜力，但是胎牛血清存在的主要问题是没有特异性指标来评价血清质量，所以不同产地、批次间的胎牛血清质量存在不同，培养出的细胞质量也会有差别，研究证实用劣质血清培养MSC细胞，细胞会提前出现“老化”现象，表现为细胞外形变得非纺锤形、端粒酶逐渐缩短、细胞增殖能力下降、细胞向骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞等分化潜能也显著减弱的现象。因此越来越多的研究者目前采用成分明确的、无动物源性成分、不含血清的培养体系培养MSC细胞，从目前的结果看无血清体系可以支持MSC细胞长期培养，但是与胎牛血清体系相比仍存在不足，主要问题是细胞增殖缓慢且分化能力有差别。目前最理想的血清替代物是人血小板裂解液，其既可以避免胎牛血清带来的异种病毒污染的可能，又能完全代替血清促进MSC的体外培养，但血小板裂解液的来源是目前存在的主要问题，高额的价格极大的限制了其应用规模。

发明内容

在一些实施方案中，本发明提供了一种无血清培养基，包括基础培养基和添加成分，所述添加成分包括JNK通路抑制剂、ERK1/2通路抑制剂、P38 MAPK通路抑制剂和氨基乙醇，所述的JNK通路抑制剂包括但不限于SP600125，ERK1/2通路抑制剂包括但不限于PD0325901，P38 MAPK通路抑制剂包括SB202190、SB203580和BIRB796中的至少一种。

在一些实施方案中，所述基础培养基包括DMEM/F12、a-MEM、DMEM或IMDM。

在一些实施方案中，所述基础培养基还可以是Knock out DMEM/F12。

在一些实施方案中，所述SP600125、PD0325901、P38 MAPK通路抑制剂和氨基乙醇的浓度分别为1-10uM，1-10uM，1-10uM和0-10mg/L。