[发明专利]一种提升两歧双歧杆菌增殖效率的肽及其应用

说明书

本发明公开了一种提升两歧双歧杆菌增殖效率的肽及其应用，属于微生物技术领域。本发明为解决因氮源利用率低影响两歧双歧杆菌增殖的问题，提供了一种可提升两歧双歧杆菌增殖效率的方法，该方法以富含脯氨酸的分子量为200～1000Da的具有高亲水性的肽作为培养基的氮源培养两歧双歧杆菌。利用该方法培养两歧双歧杆菌，4g/L氮源浓度下发酵液OD₆₀₀高于1.6，为其他氮源的1.9～7倍，代时小于2.6h，氮源利用率高于30％。该方法在实现高效促进菌株生长的同时，显著提高氮源利用效率，有效减少氮源的浪费。

技术领域

本发明涉及一种提升两歧双歧杆菌增殖效率的肽及其应用，本发明属于微生物技术领域。

背景技术

两歧双歧杆菌在身体肠内发醇后可产生乳酸菌和冰醋酸，能提升钙、磷、铁的使用率，推动铁和维他命D的消化吸收。两歧双歧杆菌发醇乳清蛋白产生的的的的半乳糖，是组成中枢神经系统中脑苷脂的成份，与婴儿出生后脑勺的快速生长发育有密切相关。两歧双歧杆菌能够合成维生素b21、B2、B6、B12及丙氨酸、缬氨酸、天冬氨酸和苏氨酸等身体必不可少的营养元素，针对身体具备不可忽视的关键营养成分功效。鉴于其具有上述有效的益生功能，两歧双歧杆菌也越来越成为人们研究、开发、生产的重点，也被逐渐应用到益生菌乳制品生产中。但是目前商业化应用的两歧双歧杆菌菌株种类较少，主要在于两歧双歧杆菌的制备非常困难，氮源是制约其有效增殖的关键因素之一。

目前，国内外对于两歧双歧杆菌的培养优化，主要是通过单因素试验和正交试验筛选优质的氮源，主要包括酵母浸粉、大豆蛋白胨、胰蛋白胨、鱼骨蛋白胨等多种氮源。但是，两歧双歧杆菌的耐渗透压能力不强，而这类方法确定的氮源的添加量往往是过量的，生长过程中，培养基中会残留大量未被利用的肽和氨基酸，利用效率低，不仅会提高发酵液的渗透压从而抑制菌株的增殖，也会造成氮源的浪费。

基于上述一系列问题，研究两歧双歧杆菌选择性利用的氮源，寻找可有效促进两歧双歧杆菌增殖的肽显得尤为重要。因此，为了更好地将两歧双歧杆菌应用于商业化生产，亟需找到一种适用于两歧双歧杆菌高效增殖的肽，以降低企业生产经济并缩短两歧双歧杆菌的代时，提高两歧双歧杆菌活菌数的产量。

发明内容

本发明针对两歧双歧杆菌培养过程中因氮源利用率低影响两歧双歧杆菌增殖的问题，提供了一种分子肽在提升两歧双歧杆菌增值效率中的应用，所述分子肽为脯氨酸含量介于25％～28％、分子量介于200～1000Da的亲水性肽。

在本发明的一种实施方式中，两歧双歧杆菌生长体系中还含有葡萄糖、无水乙酸钠、KH₂PO₄、K₂HPO₄、MgSO₄·7H₂O、MnSO₄·4H₂O、FeSO₄、柠檬酸氢二铵、吐温、半胱氨酸盐酸盐、CaCl₂、酵母浸出粉、胡萝卜汁。

在本发明的一种实施方式中，所述分子肽作为培养体系中的氮源。

本发明还提供了脯氨酸含量介于25％～28％、分子量介于200～1000Da的亲水性肽的制备方法，具体步骤如下：

(1)将酪蛋白与水混匀后，加入蛋白酶，进行酶解，经灭酶处理后，沉淀未水解蛋白并离心收集蛋白酶解液，对蛋白酶解液真空冷冻干燥得到酪蛋白酶解物干粉；

(2)将酪蛋白酶解物干粉溶于水后，用截流量为2000Da的滤膜进行超滤处理并收集滤液；

(3)采用NAK-II大孔树脂对步骤(2)获得的滤液浓缩富集，最后采用纳滤膜收集分子量介于200～1000Da的组分，即得分子量为200～1000Da的肽。