[发明专利]一种复合PRP和胶原蛋白的温敏水凝胶制备方法及应用

说明书

本发明涉及一种复合PRP和胶原蛋白的温敏水凝胶制备方法及应用，在4‑25℃下，使用前30min中内通过如下步骤制得：首先选择胶原蛋白，并利用酸溶液对其进行溶解，之后利用碱溶液调节pH值，并稀释制得一定浓度的胶原蛋白溶液；然后使用经过肝素或肝素类多糖溶液浸润过的取血容器抽取自体血液来制得PRP；最后将制得的胶原蛋白溶液、PRP和一定浓度的肝素或肝素类多糖溶液混合制得使用前成液态的水凝胶，并公开了该水凝胶的应用。该发明的水凝胶具有温度敏感的特点，温度变化形成熵驱动过程，使得胶原蛋白分子自组装成胶原纤维而形成凝胶，其能促进细胞增殖、分化，从而加快受损组织的修复，制备简单方便，也便于使用。

技术领域

本发明涉及医疗材料领域，尤其是一种复合PRP和胶原蛋白的温敏水凝胶制备方法及应用。

背景技术

胶原蛋白是动物结缔组织中的主要成分，也是哺乳动物体内含量最多、分布最广的功能性蛋白，占蛋白质总量的25％～30％，某些生物体甚至高达80％以上。一般是白色、透明的粉状物，分子呈细长的棒状，相对分子质量从约2kD至300kD不等。胶原蛋白具有很强的延伸力，具有良好的保水性和乳化性。胶原蛋白因具有良好的生物相容性、可生物降解性以及生物活性，因此在食品、医药、组织工程、化妆品等领域获得广泛的应用。

富血小板血浆(PRP)是将动物或人的全血经过离心后得到的富含高浓度血小板的血浆。PRP中的血小板被激活后释放大量的生长因子如血小板源性生长因子(PDGF)、转化生长因子β(TGF-β)、胰岛素样生长因子1(IGF-1)、表皮生长因子(EGF)，血管内皮生长因子(VEGF)等。除了释放生长因子外，激活的血小板还释放活性小分子包括儿茶酚胺、组胺、血清素、ADP、ATP、钙离子和多巴胺.这些释放是活性物质激活血管收缩，增加毛细血管通透性，吸引和激活巨噬细胞，组织塑形和再生。在组织受损后出血形成的血凝块后10分钟血小板开始释放这些活性分子，有超过95％的生长因子在1小时内释放。血小板有调节创伤修复以及肿瘤转移的平衡作用。在创伤修复领域，血小板释放的纤维蛋白、粘连蛋白、SDF-1等因子在促进细胞增殖、调节干细胞向创伤组织迁移等作用。

于是出现了将胶原蛋白和PRP复合形成凝胶的应用，在现有的复合方法中均是利用外加物质如促凝剂或凝血酶来刺激血小板聚集，从而形成纤维蛋白并沉淀、连接形成凝胶。由于外源性凝血酶的作用，高凝血酶浓度使得纤维蛋白原的聚合速度远高于生理反应，不利于网罗生长因子及促进细胞迁移。同时PRP由于外源性凝血酶的参与，瞬间激活了PRP中的血小板，使得其生长因子的释放集中在加入外源性凝血酶的时点附近以及使用后愈合期的早期阶段，而后期的释放较少，生长因子的释放并不均衡及持久。

发明内容

针对现有的不足，本发明提供一种复合PRP的胶原蛋白温敏水凝胶的制备方法及应用。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：一种复合PRP和胶原蛋白的温敏水凝胶制备方法，在4-25℃的室温下，该温敏水凝胶是高流动性的液态混合物，用于人体后形成固态水凝胶，该液态混合物在使用前30min中内通过如下步骤制得：

S1，选择胶原蛋白，并利用一定浓度的酸溶液对其进行溶解，之后利用一定浓度的碱溶液调节其pH值为6.6-9.2，并用纯水稀释制得质量浓度为0.5-3％的胶原蛋白溶液；

S2，使用经过一定质量浓度的肝素或肝素类多糖溶液浸润过的取血容器抽取自体血液来制得PRP；

S3，将前述步骤中制得的胶原蛋白溶液、PRP和一定质量浓度的肝素或肝素类多糖溶液混合均匀制得液态混合物，其中PRP与肝素或肝素类多糖溶液体积比为1000-200:1，PRP与胶原蛋白的体积比为1:20-4。

作为优选，所述步骤S2和步骤S3中肝素或肝素类多糖溶液的质量浓度均为0.2-2％。

作为优选，各所述步骤的制备过程中各溶液的温度均不超过25℃。