[发明专利]一种促分化培养基及促进CD34阳性细胞分化为血小板的方法有效
| 申请号： | 202110642527.4 | 申请日： | 2021-06-09 |
| 公开（公告）号： | CN113502263B | 公开（公告）日： | 2023-05-23 |
| 发明（设计）人： | 段玉友;钟志勇;王宁;陈楚欣;陈洪林 | 申请（专利权）人： | 华南理工大学 |
| 主分类号： | C12N5/078 | 分类号： | C12N5/078 |
| 代理公司： | 广州市华学知识产权代理有限公司 44245 | 代理人： | 郭炜绵 |
| 地址： | 510640 广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 分化 培养基 促进 cd34 阳性 细胞 化为 血小板 方法 | ||
1.一种促进脐带血中CD34阳性细胞分化为血小板的方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）将脐带血中CD34阳性细胞接种到早期巨核细胞分化培养基培养8天，期间换液若干次；
（2）在步骤（1）培养的第8天，吸取培养基接种到成熟巨核细胞分化培养基中培养，期间换液若干次；
（3）在培养的第14天，吸取培养基接种到血小板分化培养基培养，继续培养至少4天，期间换液若干次，得到含有血小板的分化产物；
所述的早期巨核细胞分化培养基是在StemSpan™ SFEM II培养基中添加50ng/mL 人干细胞因子（SCF）、100ng/mL 人血小板生成素（TPO）、20ng/mL人白细胞介素3（IL3）、50ng/mL人白细胞介素6（IL6）和20ng/mL人白细胞介素11（IL11）细胞因子；
所述的成熟巨核细胞分化培养基是在SFM培养基中添加20ng/mL SCF、50ng/mL TPO和20ng/mL IL11细胞因子；
所述的血小板分化培养基是在SFM培养基中添加50ng/mL TPO和10ng/mL IL11细胞因子。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（1）所述的脐带血中CD34阳性细胞，是用Ficoll法密度梯度离心得到脐带血中的单核细胞，再用磁珠分选试剂盒分选出脐带血中CD34阳性细胞。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（1）-（3）所述的培养，是在5% CO2、37℃下培养。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（2）和（3）所述的接种，是将吸取的培养基离心，吸弃上清，然后加入下一种培养基。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述的离心，是900rpm离心5分钟。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（1）所述的接种，脐带血中CD34阳性细胞为5万个，培养基2毫升。
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