[发明专利]用于BACE1的磁微粒化学发光免疫检测试剂盒

权利要求书

1.用于BACE1的磁微粒化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于：所述的试剂盒包括校准品、质控品、磁微粒混悬液、抗体标记物、浓缩洗液、发光底物；所述的校准品由BACE1抗原配置而成；

所述的质控品为含有一定浓度的BACE1抗原，由质控品稀释液配置而成；

所述的磁微粒混悬液含有一定浓度磁微粒标记的BACE1抗体溶液。

2.根据权利要求1所述的用于BACE1的磁微粒化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于：所述的磁微粒混悬液制备方法如下所示：

1)洗涤：20μL磁微粒原液，磁架上分离弃去上清液，加入300μL MES缓冲液，混匀5分钟，磁架上分离弃去上清液，反复洗涤5次；

2)活化：加入50μL的50mg/mLEDC、50mg/mL NHS，200r/min，活化0.5-1h；EDC溶液是将EDC试剂溶解于pH5.0的100mM的MES缓冲液中得到，NHS溶液是将NHS试剂溶解于pH5.0的100mM的MES缓冲液中得到；

3)洗涤：将上述溶液置于磁架上分离，弃去上清液，加入300μL MES缓冲液，混匀，磁架上分离弃去上清液，洗涤2次；

4)包被：加入MES缓冲液和预包被抗体，磁微粒和抗体的质量比为80:1，混匀后，室温反应10-16h；

5)封闭：将上述溶液置于磁架上分离，弃去上清液，加入100-300μL磁微粒封闭液，摇匀后，室温反应10-16h；

6)将上述溶液置于磁架上分离，弃去上清液，加入一定的磁珠封保液，得到BACE1磁微粒混悬液。

3.根据权利要求1所述的用于BACE1的磁微粒化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于：所述的抗体标记物为含有一定浓度的碱性磷酸酶标记的BACE1抗体溶液或吖啶酯标记的BACE1抗体溶液。

4.根据权利要求3所述的用于BACE1的磁微粒化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于：所述的碱性磷酸酶标记抗体制备方法如下所示：

1)BACE1抗体与碱性磷酸酶，碱性磷酸酶的质量为抗体的2倍，分别除盐、浓缩，然后加入活化剂，室温，分别活化30min；除盐使用SepHadex G25凝胶柱子除盐；BACE1抗体活化用到的活化剂为2IT，碱性磷酸酶活化用到的活化剂为SMCC；

2)活化后的BACE1抗体与碱性磷酸酶可按照质量比例进行混合后反应；然后进行终止反应和分离纯化，除去未结合的BACE1抗体与碱性磷酸酶，制备得到抗体标记物浓缩液，保存于2-8℃；终止反应过程中，首先加入10mM马来酰亚胺，室温反应10min；再加入乙醇胺100mM的量；分离纯化柱为SuperdexTM200。

5.根据权利要求3所述的用于BACE1的磁微粒化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于：所述的吖啶酯标记抗体制备方法如下所示：

1)BACE1抗体与吖啶酯，吖啶酯的质量为抗体的50倍，充分混匀，37度反应2小时以上，加入赖氨酸终止反应；

2)将标记后的吖啶酯标记抗体用脱盐层析柱纯化，收集纯化后的吖啶酯标记抗体。

6.根据权利要求1所述的用于BACE1的磁微粒化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于：试剂盒检测方法如下所示：

1)免疫反应：25μL样本/质控品、20μL磁微粒、50μL抗体标记物，37℃温育30min，洗涤6次；

2)磁分离：在磁场中将磁微粒沉降，去上清，加入100μL的洗涤液，在磁场中将磁微粒沉降，去上清，重复3次，除去未结合的抗体；

3)检测读数：加入发光底物，室温反应，5min内检测发光值；

4)计算：该复合物催化发光底物发出光子，发光强度与BACE1的含量成正比；选择适当的曲线拟和方式建立标准曲线；本试剂盒推荐采用四参数拟和方式，以校准品浓度值为x轴，以校准品发光强度值的对数log值为y轴建立标准曲线，根据待测样品的发光强度值回算相应的浓度值。