[发明专利]用于BACE1的磁微粒化学发光免疫检测试剂盒

说明书

本发明公开了用于人β位淀粉样前体蛋白裂解酶1(以下简称BACE1)的磁微粒化学发光免疫检测试剂盒，所述的试剂盒包括校准品、质控品、磁微粒混悬液、抗体标记物、浓缩洗液、发光底物；所述的校准品由BACE1抗原配置而成；所述的质控品为含有一定浓度的BACE1抗原，由质控品稀释液配置而成；所述的磁微粒混悬液含有一定浓度磁微粒标记的BACE1抗体溶液。本发明的有益效果是，本发明的试剂盒具有灵敏度高、无污染、操作简单、特异性好、快速定量检测的优点。

技术领域

本发明涉及试剂盒检测技术领域，特别是用于检测人β位淀粉样前体蛋白裂解酶1(BACE1)的磁微粒化学发光免疫检测试剂盒及其方法。

背景技术

阿尔茨海默病(Alzheimer’s Disease，AD)是一种伴有认知、行为和功能失常的进行性的常见神经退行性疾病，其主要病理特征为老年斑形成、神经元缺失、神经原纤维缠结。主要影响老年人的认知以及行为能力，主要影响60岁以上的人群，目前还没有有效的治疗手段。其发病主要与淀粉样β蛋白(β-amyloid，AP)异常沉积有关。老年斑的主要组分即为Aβ，由β淀粉样前体蛋白(β-amyloid precursor protein，APP)相继被β-分泌酶和γ-分泌酶切割后形成。目前β位淀粉样前体蛋白裂解酶1(BACE1)和β位点APP裂解酶2(BACE2)被认为是两个主要的β-分泌酶。研究表明BACE1在β淀粉样前体蛋白过程中起到关键的作用。故在此过程中，脑脊液中BACE1的含量可以较好地反映神经元的活性。

人β位淀粉样前体蛋白裂解酶1(BACE1)，是在外周神经细胞中形成髓鞘的一种重要的天冬氨酸蛋白酶，是一种包含两个活性位点的跨膜蛋白。神经细胞通过神经突互相联系，阿尔茨海默疾病患者中，神经原轴突显示进行性退化，BACE1被认为是预测阿尔茨海默疾病进展的较好的生物标志物。目前可用于β位淀粉样前体蛋白裂解酶1检测方法主要有放射免疫测定法RIA，酶联免疫法(ELISA)和免疫层析法等。这些方法均有一定的缺陷，RIA污染大，ELISA法操作过程复杂，检测时间过长，不利于实现BACE1的自动化检测，免疫层析法检测重复性差、灵敏低。因此，目前尚需一种污染小、灵敏度高、操作简单、自动化程度高，特异性好的BACE1的快速定量检测试剂盒及其使用方法。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的缺点，提供用于BACE1的磁微粒化学发光免疫检测试剂盒。本发明的试剂盒具有灵敏度高、无污染、操作简单、特异性好、快速定量检测的优点。

本发明的目的通过以下技术方案来实现：用于BACE1的磁微粒化学发光免疫检测试剂盒，本发明所述的试剂盒包括校准品、质控品、磁微粒混悬液、抗体标记物、浓缩洗液、发光底物；所述的校准品由BACE1抗原配置而成；所述的质控品为含有一定浓度的BACE1抗原，由质控品稀释液配置而成；所述的磁微粒混悬液含有一定浓度磁微粒标记的BACE1抗体溶液。

本发明所述的磁微粒混悬液制备方法如下所示。

1)洗涤：20μL磁微粒原液，磁架上分离弃去上清液，加入300μL MES缓冲液，混匀5分钟，磁架上分离弃去上清液，反复洗涤5次；

2)活化：加入50μL的50mg/mLEDC、50mg/mL NHS，200r/min，活化0.5-1h；EDC溶液是将EDC试剂溶解于pH5.0的100mM的MES缓冲液中得到，NHS溶液是将NHS试剂溶解于pH5.0的100mM的MES缓冲液中得到；

3)洗涤：将上述溶液置于磁架上分离，弃去上清液，加入300μL MES缓冲液，混匀，磁架上分离弃去上清液，洗涤2次；

4)包被：加入MES缓冲液和预包被抗体，磁微粒和抗体的质量比为80:1，混匀后，室温反应10-16h；

5)封闭：将上述溶液置于磁架上分离，弃去上清液，加入100-300μL磁微粒封闭液，摇匀后，室温反应10-16h；