[发明专利]一种用于肺癌蛋白检测的试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种用于肺癌蛋白检测的试剂盒，其特征在于，包括如下试剂：

重标同位素标记标准肽段，所述标准肽段包含来源于不同蛋白的unique肽段序列；重标肽段复溶储备液；稀释液。

2.根据权利要求1所述的用于肺癌蛋白检测的试剂盒，其特征在于，所述不同蛋白包括ALK、BRAF、EGFR、HER2、MEK1、MET、MTOR、ROS1、PD-L1、PIK3CA、NTRK和Ras，其中包括对应基因的特有肽段序列和同家族基因共有序列以及基因特定突变之后的氨基酸序列。

3.根据权利要求1所述的用于肺癌蛋白检测的试剂盒，其特征在于，所述重标肽段复溶储备液为0.1％甲酸水配置的50％乙腈溶液；所述稀释液为0.1％甲酸水溶液。

4.根据权利要求1所述的用于肺癌蛋白检测的试剂盒，其特征在于，所述重标同位素标记位于所述标准肽段的C末端的氨基酸上；所述标准肽段等摩尔浓度混合。

5.一种肺癌蛋白的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

将肺癌组织样本进行蛋白提取和酶解后，与iRT标肽和重标同位素标记标准肽段混合后进行色谱分离以及质谱扫描采集质谱数据；其中，在所述质谱扫描采集过程中，采用DIA扫描模式结束后，进行PRM扫描采集；对所述质谱数据中的蛋白进行定性与定量分析，获得所述肺癌蛋白质组定性与相对定量信息的同时，得到目的蛋白的绝对定量值。

6.根据权利要求5所述的肺癌蛋白的检测方法，其特征在于，所述色谱分离的流动相和梯度设置如下：

流动相A：100％色谱级水+0.1～0.2％甲酸；

流动相B：70-90％色谱级乙腈+0.1～0.2％甲酸；

色谱梯度：100-150分钟梯度。

7.根据权利要求5所述的肺癌蛋白的检测方法，其特征在于，采用色谱分离柱进行所述色谱分离，色谱条件如下：

预柱外径350-370um，内径90-110um，填料是2-4um的C18，填料总长1-2cm；

色谱柱长度24-26cm，外径350-370um，内径140-160um，一体化色谱柱柱尖开口3～5um，填料是1.5-2.4um粒径的C18反相填料。

8.根据权利要求5所述的肺癌蛋白的检测方法，其特征在于，采用质谱仪Q-ExactiveHF(Thermo)进行所述质谱扫描，设置一级质谱和二级扫描。

9.根据权利要求5所述的肺癌蛋白的检测方法，其特征在于，DIA扫描模式结束后，进行10个PRM的扫描事件，将目的肽段的序列加在DIA窗口之后，设定PRM目的肽段的扫描窗口，具体RT时间根据预扫目标肽段的RT时间来设定。

10.根据权利要求5所述的肺癌蛋白的检测方法，其特征在于，对质谱数据进行Spectronaut抽提处理，随后进行Skyline软件处理，内源性目的肽段和重标肽段的定量值，根据标准曲线计算目的蛋白的绝对定量值。