[发明专利]一种用于肺癌蛋白检测的试剂盒及检测方法

说明书

本发明公开了一种适用于肺癌蛋白检测的试剂盒及检测方法，所述检测方法包括将重标肽与肿瘤组织酶解后的肽段进行一定比例的混合，然后进行色谱分离以及质谱扫描采集质谱数据；其中，在所述质谱扫描采集过程中，采用DIA扫描模式结束后，并行进行PRM扫描采集；该方法可对目的蛋白进行高灵敏度的绝对定量分析的同时，获得整个肿瘤全谱蛋白质组的定性与定量信息。本发明方法具有方便快捷、高通量、高特异性及准确度高等优点；在保证检测结果中蛋白质数量的同时有效提高丰度较低目的蛋白质定量的可信度。本发明试剂盒所含试剂均为肽段干粉，无可挥发性、有毒、有害物质，安全性高，采用该方法得到的实验结果真实可靠，可重复性强。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体地，涉及一种用于肺癌蛋白检测的试剂盒及检测方法。

背景技术

肺癌是恶性肿瘤中发病率和病死率最高的恶性肿瘤之一，其中非小细胞肺癌(NSCLC)占肺癌的85％左右。近年来，分子靶向治疗已经成为肺癌研究热点，越来越多分子靶点的发现及靶向药物以及免疫治疗的研发给肺癌患者长期生存带来了希望。随着肿瘤个体化治疗理念的提倡、分子检测技术的进步和靶向治疗药物的不断推出，肺癌核酸标志物检测指导治疗方案引起了众多学者的关注和探讨，其研究热点主要集中于ALK、BRAF、EGFR、KRAS、NTRK、ROS1等靶点基因突变以及融合导致的基因组以及蛋白水平的扩增或过表达。

蛋白作为最终功能的执行者以及靶向药物的作用靶点，往往需要通过免疫组织化学(IHC)的方式检测蛋白质的过表达或缺失等，从而指导药物靶向治疗，减少无效治疗。质谱作为一种检测蛋白的技术手段，越来越多的应用于临床样本蛋白的检测，尤其是质谱靶向定量技术PRM/SRM/MRM等可以直接用来靶向定量来自癌症患者的生物样本中靶向目的蛋白质表达水平，避免单纯基因检测导致的药物靶标蛋白表达的不确定性。DIA(data-independent acquisition，非数据依赖采集)技术是近年来流行的一种新的质谱技术，属于非标记蛋白质组学方法。其采用分窗口扫描模式模式，对每一个窗口中的所有离子进行检测、破碎，无遗漏无差异的记录样本中所有离子的信息。其有效的降低了样本检测的缺失值，提高了定量准确性和重读性，广泛适用于大样本队列的蛋白质组定量分析中，保证了大规模样本的高度覆盖、稳定和可追溯分析，有利于疾病标志物的筛选。虽然DIA的定量能力接近靶向定量，但往往DIA寻找标志物之后会使用靶向定量或绝对定量的方法进行再次确认验证，而往往一些低丰度的蛋白也需要较长的色谱梯度检测才能够降低背景的干扰，准确的定性和定量目的蛋白，造成了很大的机时的浪费提升了成本。

发明内容

发明目的：为解决上述技术问题，本发明提供了一种用于肺癌蛋白检测的试剂盒及检测方法，所述检测方法是基于质谱靶向PRM与DIA并行的检测技术，能够有效对肺癌中的靶向蛋白以及全蛋白质组进行检测。

技术方案：一种用于肺癌蛋白检测的试剂盒，包括如下试剂：

重标同位素标记标准肽段，所述标准肽段包含来源于不同蛋白的unique肽段序列；重标肽段复溶储备液；稀释液。