[发明专利]一种基于CRISPR/Cas系统的新型冠状病毒双靶标快速检测方法及试剂盒有效
| 申请号： | 202110648148.6 | 申请日： | 2021-06-10 |
| 公开（公告）号： | CN113373264B | 公开（公告）日： | 2022-04-12 |
| 发明（设计）人： | 杜忆南;邢晨;柳燕;周静;祝亚亭;王小凤;李倩;张智康 | 申请（专利权）人： | 安徽医科大学 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/6844;C12R1/93 |
| 代理公司： | 苏州翔远专利代理事务所(普通合伙) 32251 | 代理人： | 王华 |
| 地址： | 230000*** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 基于 crispr cas 系统 新型 冠状病毒 靶标 快速 检测 方法 试剂盒 | ||
1.一种基于CRISPR/Cas系统的新型冠状病毒双靶标快速检测的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括：
两组RT-RAA扩增引物：
Cas13-S-for：5’-GAAATTAATACGACTCACTATAGGGgctatcatcttatgtccttccctcagtcag-3’；
Cas13-S-rev：5’-aatggcaggagcagttgtgaagttcttttc-3’；
Cas12-N-for： 5’-aatgtcgcgcattggcatggaagtcaca-3’；
Cas12-N-rev：5’-gacttgatctttgaaatttggatctttg-3’；
两种CRISPR特异性检测的crRNA：
Cas12a-N-crRNA：
5’-uaauuucuacuaaguguagauauggcaccuguguaggucaa-3’；
Cas13a-S-crRNA：
5’-gauuuagacuaccccaaaaacgaaggggacuaaaacCAUAAGUCACAUGCAAGAAGACUACACC-3’；
RNA荧光探针：5’-FAM-mArArUrGrGrCmAmArArUrGrGrCmA-BHQ1-3’；
其中，m代表2位氧甲基修饰，r代表核糖核苷酸；
DNA荧光探针：5’ -VIC-TTATTATT-BHQ1-3’。
2.根据权利要求1所述的基于CRISPR/Cas系统的新型冠状病毒双靶标快速检测的试剂盒，其特征在于：还包括buffer A溶液和BufferB溶液；buffer A溶液配置方法为：向1L水中加入50mmol的Tris缓冲液，100nmol的醋酸钾，20g的聚乙二醇粉末和2mmol二硫苏糖醇；BufferB溶液为浓度为280mM的醋酸镁溶液。
3.根据权利要求1所述的基于CRISPR/Cas系统的新型冠状病毒双靶标快速检测的试剂盒，其特征在于：还包括： HEPES缓冲液、MgCl2溶液、10×NEB buffer2.1缓冲液、RNaseinhibitor、T7 RNA polymerase、无RNA酶水。
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