[发明专利]一种黄精多糖含量的测定方法

权利要求书

1.一种黄精多糖含量的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1：新鲜的黄精块茎先用自来水洗净，再用纯水清洗，然后切成薄片置于60℃烘箱烘焙10～14h，用粉碎机磨成300目粉末，装袋置于30℃烘箱内；

S2：取S1获取的黄精块茎粉末用滤纸和纱布包裹紧致，放入索氏提取器的提取管内，向提取瓶内加入石油醚，于恒温85℃下回流提取2～3h，充分脱脂，粉末风干，密封保存；

S3：将S2获取的脱脂完成后的粉末放入索氏提取器的提取管内，向提取瓶内加入80％乙醇溶液，于95℃下回流提取4～5h，脱去醇溶性单糖后风干密封保存；

S4：将S3获取的脱脂脱醇溶性单糖的粉末按料液比1:20加入蒸馏水后，向溶液中加入黄精块茎粉末相同质量的纤维素酶，置于超声波细胞粉碎机粉碎细胞后进行抽虑操作，并将滤渣按照本步骤进行多次抽滤操作，将多次滤液混合在一起并进行浓缩，浓缩后的溶液进行冷冻离心；

S5：将S4获取的溶液按照体积比1:4的比例加入无水乙醇，4℃冰箱过夜，冷冻离心除去乙醇，风干得到粗多糖，按本步骤进行多次操作，将粗多糖混合在一起；

S6：取S5获取的粗多糖按质量体积比为1:30加入热水将粗多糖进行复溶，加入质量比为10:1的2.5％的木瓜蛋白酶，并于恒温45℃的水浴锅水浴2～3h，再放入沸水中水浴，加入三氯乙酸，混匀，再次进行冷冻离心，取其上清液，得到待测样品溶液；

S7：利用表面活性剂与待测样品溶液混合，增大荧光同步光扫描时的光散射强度，并确定实验同步扫描散射波长范围为200～800nm；

S8：在比色管中依次加入0.5mol/L～3mol/L的NaOH、0.5mol/L～4mol/L的表面活性剂，摇匀加入S6制得的待测样品溶液，其中NaOH：表面活性剂：待测样品溶液的体积比为1:2:2，然后加入超纯水稀释并摇匀混合，其中超纯水：待测样品溶液的体积比为1:5，稀释混合后在室温下反应20～40min，设置激发狭缝分别为5nm和2nm，在波长为200～800nm范围的荧光分光光度计上进行同步扫描，获得RLS光谱，并以不加黄精多糖溶液的为空白组得到I⁰RLS，最大共振散射波长处测定体系的散射光强度与空白散射光强度，计算△IRLS＝IRLS-I⁰RLS，根据△IRLS得到多糖的含量，其中：多糖含量(％)＝(被测样品中的多糖含量/总提取液的多糖含量)×100％；

S9：根据S8测定多糖含量测定方法，以质量浓度为横坐标，共振光强度为纵坐标制作标准曲线，绘制多糖含量的标准曲线图；

S10：再现性试验，按照上述步骤对同一批次黄精多糖含量进行重复测定。

2.根据权利要求1所述的一种黄精多糖含量的测定方法，其特征在于：在S4中，超声波细胞粉碎机的功率为240W，混合溶液置于超声波细胞粉碎机内的时间为30min；浓缩混合溶液采用旋转蒸发仪；溶液冷冻离心采用冷冻高速离心机冷冻离心，冷冻离心的温度为4℃、转速为10000r/min、时间为20min。

3.根据权利要求1所述的一种黄精多糖含量的测定方法，其特征在于：在S5中，溶液冷冻离心采用冷冻高速离心机冷冻离心，冷冻离心的转速为4000r/min、时间为20min。

4.根据权利要求1所述的一种黄精多糖含量的测定方法，其特征在于：在S6中，使用超声对粗多糖进行复溶，复溶的时间为10min；利用酶辅助三氯乙酸(TCA)沉淀法除去滤液中的蛋白质；浓缩混合溶液采用旋转蒸发仪；溶液冷冻离心采用冷冻高速离心机冷冻离心，冷冻离心的温度为4℃、转速为10000r/min、时间为20min。

5.根据权利要求1所述的一种黄精多糖含量的测定方法，其特征在于：在S7中，表面活性剂为氯化十六烷基吡啶(CPC)。