[发明专利]一种黄精多糖含量的测定方法

说明书

本发明属于多糖测定技术领域，公开了一种黄精多糖含量的测定方法，包括S1：制备黄精块茎粉末；S2：粉末脱脂；S3：索氏提取法脱醇溶性单糖；S4：加入蒸馏水和纤维素酶得到混合溶液，对混合溶液进行抽滤、浓缩；S5：加入无水乙醇冷冻离心得到粗多糖；S6：复溶粗多糖除去溶液中的蛋白质，向溶液中加入木瓜蛋白酶和三氯乙酸水浴得到待测样品溶液；S7：利用表面活性剂与待测样品溶液混合确定扫描散射波长；S8：待测样品溶液加入NaOH、表面活性剂和超纯水，用荧光分光光度计测定溶液的多糖含量；S9：绘制多糖含量的标准曲线图；S10：再现性试验；本发明解决了现有技术测定黄精多糖含量过程复杂、测定效率低和灵敏度低的问题，适用于黄精多糖含量的测定。

技术领域

本发明涉及多糖测定技术领域，具体为一种黄精多糖含量的测定方法。

背景技术

黄精是一类多年生的草本植物，隶属百合科黄精属，中国药典中收录了滇黄精、多花黄精和黄精三种，是我国少有的传统补气中药材之一，药用历史已超过2000年，黄精具有增强免疫功能、调节血糖血脂、抗氧化、改善记忆、防治糖尿病、防治骨质疏松、抗肿瘤、抗衰老、预防肝损伤及抗炎抑菌等作用。黄精生长于水分充足富含营养物质的阴凉砂土中，主要海拔在200～2000m，广泛分布于我国各地，黄精中主要含有黄精多糖、生物碱、蒽醌类化合物、甾体皂苷等，其中黄精多糖的含量最高，是黄精的主要活性成分及主要功能性物质。

植物多糖又称植物多聚糖，是由单糖缩合而成，在自然界中普遍存在，主要是由相似或者不相似的单糖α-或者β-糖苷键组成，是一类聚合度超过10个的天然化合物，同时也是自然界中比例最高的一类聚合物。现代药理学研究发现，植物多糖具很多特有的药理作用，包括抗氧化、抗肿瘤、抗衰老、降血糖、降血脂等。目前，植物多糖应用于食品、日化、医药等多个行业，随着科学研究的进一步发展，植物多糖在更多的领域发挥作用，因此植物多糖含量的测定成为了当下学者非常重要的研究方向之一。

目前，国内外对于植物多糖含量的测定方法主要有苯酚-硫酸比色法、蒽酮-硫酸比色法、硫酸-咔唑比色法、DNS法(3，5-二硝基水杨酸法)、间羟基联苯比色法等，主要原理是利用多糖与一些试剂反应显色，然后利用其吸光度和含量呈线性关系的原理进行测定，在实验的过程中不仅需要用到不同的显色剂，而且还需要加入一些强酸等危险性较高的化学试剂，测量存在较大的局限性，而且测定过程复杂、测定效率低和灵敏度低。

发明内容

本发明意在提供一种黄精多糖含量的测定方法，以解决现有技术测定黄精多糖含量过程复杂、测定效率低和灵敏度低的问题。

为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种黄精多糖含量的测定方法，包括以下步骤：

S1：新鲜的黄精块茎先用自来水洗净，再用纯水清洗，然后切成薄片置于60℃烘箱烘焙10～14h，用粉碎机磨成300目粉末，装袋置于30℃烘箱内；

S2：取黄精块茎粉末用滤纸和纱布包裹紧致，放入索氏提取器的提取管内，向提取瓶内加入石油醚，于恒温85℃下回流提取2～3h，脱脂充分，粉末风干，密封保存；

S3：将S2获取的脱脂完成后的粉末放入索氏提取器的提取管内，向提取瓶内加入80％乙醇溶液，于95℃下回流提取4～5h，脱去醇溶性单糖后风干密封保存；

S4：将S3获取的脱脂脱醇溶性单糖的粉末按料液比1:20加入蒸馏水后，向溶液中加入黄精块茎粉末相同质量的纤维素酶，置于超声波细胞粉碎机粉碎细胞后进行抽虑操作，并将滤渣按照本步骤进行多次抽滤操作，将多次滤液混合在一起并进行浓缩，浓缩后的溶液进行冷冻离心；

S5：将S4获取的溶液按照体积比1:4的比例加入无水乙醇，4℃冰箱过夜，冷冻离心除去乙醇，风干得到粗多糖，按本步骤进行多次操作，将粗多糖混合在一起；