[发明专利]一种基于数字PCR检测裂谷热病毒的试剂盒及其检测方法在审
| 申请号： | 202110650219.6 | 申请日： | 2021-06-10 |
| 公开（公告）号： | CN113308576A | 公开（公告）日： | 2021-08-27 |
| 发明（设计）人： | 师永霞;张璐;郑夔;孙芳芳;戴俊;王疆荣;黄树祥 | 申请（专利权）人： | 广州海关技术中心 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/6851;C12R1/93 |
| 代理公司： | 广州三环专利商标代理有限公司 44202 | 代理人： | 颜希文 |
| 地址： | 510000 广东省广州市*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 基于 数字 pcr 检测 裂谷 病毒 试剂盒 及其 方法 | ||
1.一种基于数字PCR检测裂谷热病毒的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括数字PCR引物和探针；
所述数字PCR引物及探针的序列为：
上游引物RVFV-f：5’-GAAAATTCCTGAGACACATGGCAT-3’；
下游引物RVFV-r：5’-TTCCACTTCCTTGCATCATCTGA-3’；
探针RVFV-p：5’-CACAAGTCCACACAGGCCCCTTACATT-3’。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述探针的5’标记FAM，3’标记BHQ1。
3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括数字PCR预混液、逆转录酶、上下游引物、探针、H2O和模板。
4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中各组分的含量为：数字PCR预混液11.5μL、逆转录酶1μL、上下游引物各0.4μL、探针0.4μL、H2O 4.3μL和模板2μL，终体系20μL。
5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述上下游引物的终浓度为0.4μM，所述探针的终浓度为0.2μM。
6.一种利用权利要求1-5任一所述试剂盒检测裂谷热病毒的方法，其特征在于，其具体检测方法包括如下步骤：
(1)提取裂谷热病毒RNA；
(2)制备含有核酸样品的数字PCR反应体系；
(3)制备微滴；
(4)数字PCR扩增；
(5)读取微滴的荧光信号，分析和确定裂谷热病毒的靶标拷贝数。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述扩增反应程序为：97℃10min；95.3℃30s，54℃60s，40个循环；98℃10min；20℃1min。
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