[发明专利]一种检测血清中5-羟色胺和褪黑素浓度的试剂盒

说明书

本发明提供一种检测血清中5‑羟色胺和褪黑素浓度的试剂盒，采用本发明的试剂盒检测血清中5‑羟色胺和褪黑素浓度时，在血清样品的预处理过程中采用碳酸钠溶液作为pH调节剂，甲基叔丁基醚作为萃取液，可以增强5‑羟色胺的萃取效率，并筛选出最佳的流动相、梯度和色谱柱等色谱条件，可以一次性对血清中5‑羟色胺和褪黑素同时进行检测，灵敏度高、特异性强、准确且前处理过程简单，5.5分钟之内完成血清中5‑羟色胺和褪黑素的分离和检测，准确度与精密度基本满足要求，可用于临床上血清中5‑羟色胺和褪黑素的定量分析，为临床上5‑羟色胺和褪黑素浓度监测提供简单快速的检测方法。

技术领域

本发明属于血液检测技术领域，具体涉及一种检测血清中5-羟色胺(5-Hydroxytryptamine，5-HT)和褪黑素(Melatonin，MLT)浓度的试剂盒。

背景技术

5-羟色胺和褪黑素作为人体内重要的吲哚胺类神经递质，具有调节生物节律、情绪、认知、清除自由基、促进炎信号传导等多种生物活性，同时还对骨代谢有着重要的影响。褪黑素是5-羟色胺的代谢产物，可经由5-羟色胺N-乙酰转移酶和5-羟色胺N-乙酰甲氧基转移酶转化为褪黑素。近年来的国内外研究发现，5-羟色胺参与了骨形成和骨重吸收的过程，包括中枢5-羟色胺的促进成骨作用和外周5-羟色胺对骨形成的负性调节作用；而褪黑素同样具有促进成骨细胞增殖和分化以及骨分化标记物表达作用，同时可以通过促进OPG分泌和消除破骨细胞自由基来抑制破骨细胞分化，5-羟色胺和褪黑素在维持骨代谢动态平衡中都扮演着至关重要的角色，为骨质疏松等骨代谢疾病提供了新的靶点和方向。利用超高效液相色谱串联质谱技术同时检测血清中5-羟色胺和褪黑素浓度，可以通过循环5-羟色胺和褪黑素水平来反应人体骨量和骨结构的变化，用于评估老年人、绝经后妇女、2型糖尿患者等人群的骨质酥松情况，为临床诊治提供科学依据。

北京洛奇临床检验所股份有限公司于2016年申请的中国专利(申请号:201610220614.X)公开了一种“高效液相色谱串联质谱技术检测唾液中褪黑素的方法及试剂盒”，其提供了一种利用高效液相色谱串联质谱法检测唾液中褪黑素的方法，该方法检测成分单一，基质简单，而且如果是只检测褪黑素，前处理条件非常简单，萃取液毒性也很大，氮吹时间较长，不适用于血清样品的前处理，即使采用该专利中的色谱条件和前处理方法也无法同时检测5-羟色胺和褪黑素，对于血清中褪黑素的临床检测没有太大参考价值。另一篇专利(申请号:201910058794.X)公开了“一种采用HPLC同时检测酱油中多种生物胺含量的方法”，该专利里中待测物虽然含有5-羟色胺，但待测样品不是生物样品，基质简单，而且前处理采用衍生法，非常复杂。

由于5-羟色胺和褪黑素分别属于碱性和中性物质，一同检测比较困难，目前关于血清中5-羟色胺和褪黑素的一同检测尚未见报道，Chau RM(Chau RM,PatelBA.Determination of serotonin,melatonin and metabolites in gastrointestinaltissue using high-performance liquid chromatography with electrochemicaldetection.Biomed Chromatogr.2009,23(2):175-81.)等人采用电化学分析技术一同检测胃肠道中的5-羟色胺和褪黑素，灵敏度低(褪黑素的检测限为70ng/ml)，不能满足临床血样检测需求，分析时间长(30min)，也不利于临床应用。

发明内容

本发明的目的是在现有技术的基础上，提供一种检测血清中5-羟色胺和褪黑素浓度的试剂盒。

本发明的另一目的是提供上述试剂盒在利用超高效液相色谱串联质谱技术检测血清中5-羟色胺和褪黑素的应用。

本发明的技术方案如下：

一种检测血清中5-羟色胺和褪黑素浓度的试剂盒，

其中，5-羟色胺和褪黑素对应的内标物分别为：5-羟色胺-d4(5-HT-d4)，褪黑素-d4(MLT-d4)；