[发明专利]一种新型冠状病毒多重检测的RT-LAMP引物组合及其试剂盒

权利要求书

1.一种用于新型冠状病毒多基因检测的RT-LAMP引物组合，其特征在于，包含以下引物组A～G中任意两组及以上的RT-LAMP引物组合；

用于检测新型冠状病毒S基因的RT-LAMP引物组A由SEQ ID No.1～No.6所示的核苷酸序列组成；

用于检测新型冠状病毒E基因的RT-LAMP引物组B由SEQ ID No.7～No.12所示的核苷酸序列组成；

用于检测新型冠状病毒M基因的RT-LAMP引物组C由SEQ ID No.13～No.18所示的核苷酸序列组成；

用于检测新型冠状病毒N基因的RT-LAMP引物组D由SEQ ID No.19～No.24所示的核苷酸序列组成；

用于检测新型冠状病毒ORF1ab基因的RT-LAMP引物组E由SEQ ID No.25～No.30所示的核苷酸序列组成；

用于检测新型冠状病毒ORF3a基因的RT-LAMP引物组F由SEQ ID No.31～No.36所示的核苷酸序列组成；

用于检测新型冠状病毒ORF7a基因的RT-LAMP引物组G由SEQ ID No.37～No.42所示的核苷酸序列组成。

2.一种新型冠状病毒多重核酸检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含权利要求1所述的RT-LAMP引物组合。

3.根据权利要求2所述的新型冠状病毒多重核酸检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括固定蜂巢芯片的8连管A，收集待测核酸样本的8连管B和用于密封的8连管C；还包含RT-LAMP反应液、阳性和阴性对照。

4.根据权利要求2或3所述的新型冠状病毒多重核酸检测试剂盒，其特征在于，所述的RT-LAMP引物组合是经过EP管内和芯片上的RT-LAMP反应层层筛选获得，各引物组分别被预固定在蜂巢芯片的不同毛细管内。

5.根据权利要求3所述的新型冠状病毒多重核酸检测试剂盒，其特征在于，所述的蜂巢芯片的上下表面均经过疏水修饰，形成“孔内亲水、孔外疏水”的模式。

6.根据权利要求3所述的新型冠状病毒多重核酸检测试剂盒，其特征在于，所述的RT-LAMP反应液含有1×WarmStart LAMP Master Mix、0.8UμL^-1RNase inhibitor、25μM钙黄绿素、0.5mM MnCl₂。

7.根据权利要求3所述的新型冠状病毒多重核酸检测试剂盒，其特征在于，所述的阳性对照为在蜂巢芯片上标有“PC”的毛细管内固定Human RNase P基因的RT-LAMP引物，能检测到人的基因组；阴性对照为在蜂巢芯片上标有“NC”的毛细管内不固定任何引物的对照。

8.根据权利要求2或3所述的新型冠状病毒多重核酸检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒进行检测时采用的新型冠状病毒的样本来源于人鼻咽拭子、痰液样本、肺泡灌洗液样本、血液样本、或粪便样本。

9.一种根据权利要求1所述的RT-LAMP引物组合的检测新型冠状病毒的方法，其特征在于，所述方法包括样本采集与病毒核酸提取、反应液的加载与密封、核酸的扩增与检测的步骤。

10.根据权利要求9所述的检测新型冠状病毒的方法，其特征在于，所述反应液的加载与密封的方法是通过三个8连管进行：一个是固定蜂巢芯片的8连管A，一个是收集待测核酸样本的8连管B，一个是用于密封的8连管C，通过将8连管A倒置于8连管B内，由于毛细管的虹吸作用自动进样，并且疏水修饰能够避免毛细管之间的干扰，加样完成后，再将8连管C倒置于8连管A上用无影胶进行密封；

所述的扩增与检测的方法是将密封后的蜂巢芯片置于63℃反应40～60min，并用紫外光照射进行可视化检测。