[发明专利]一种采用调节肝细胞ROS水平的磁场发生装置在调节人/鼠肝细胞氧化应激中的应用

权利要求书

1.一种采用调节肝细胞ROS水平的磁场发生装置在构建低氧化应激水平的酒精性肝病小鼠模型中的应用，其特征在于：所述磁场发生装置包括磁板；所述磁板为钕铁硼永磁铁，所述磁板的磁场为竖直方向，所述磁板的S极与小鼠相对，所述磁板上方2 cm表面的磁感应强度经磁场分布扫描仪检测为0.01-0.15 T，其对应的位置是小鼠所处的位置。

2.根据权利要求1所述的采用调节肝细胞ROS水平的磁场发生装置在构建低氧化应激水平的酒精性肝病小鼠模型中的应用，其特征在于，包括以下步骤：

（1）构建低氧化应激水平的酒精性肝病小鼠模型：将小鼠放置于磁板正上方进行磁性处理，并同时使用含1%乙醇的液体酒精饲料持续性喂养小鼠一周，然后使用含2%乙醇的液体酒精饲料喂养一周，最后使用3%乙醇的液体酒精饲料喂养一周，实验结束时处死小鼠，进行后续分析；

（2）肝脏NRF2表达和丙二醛检测：解剖小鼠，取部分肝脏组织固定在4%的甲醛中24小时，后经脱水、包埋、切片步骤，制备石蜡切片；将肝脏组织的石蜡切片，进行脱蜡和修复，5%羊血清封闭1小时，使用NRF2抗体孵育过夜；次日，二抗抗体孵育1-2小时，苏木素复染细胞核，封片后显微镜下拍照，分析NRF2的相对表达水平；另取肝脏组织研磨后，利用脂质氧化检测试剂盒检测小鼠肝脏中丙二醛的含量。

3.根据权利要求2所述的采用调节肝细胞ROS水平的磁场发生装置在构建低氧化应激水平酒精性肝病小鼠模型中的应用，其特征在于：所述步骤（1）中磁性处理的工艺为：磁板的S极向上，小鼠与磁板的S极相对，持续加磁处理3周，加磁时间为12小时/天。

4.根据权利要求1所述的采用调节肝细胞ROS水平的磁场发生装置在构建低氧化应激水平酒精性肝病小鼠模型中的应用，其特征在于：所述磁场发生装置还包括配套装置；所述配套装置包括保护套，所述保护套顶部中间位置设置有安装槽；所述磁板嵌入所述安装槽内；所述保护套底部四角连接有支架；所述保护套与所述支架的材质均为木质材料。

5.一种采用调节肝细胞ROS水平的磁场发生装置在调节酒精诱导肝细胞氧化应激水平中的应用，其特征在于：所述磁场发生装置包括磁板、细胞培养皿A和细胞培养皿B；所述磁板为钕铁硼永磁铁，所述磁板的磁场为竖直方向；所述细胞培养皿A和细胞培养皿B从下到上叠加放置于磁板正上方，磁板的S极向上；所述细胞培养皿A处的磁感应强度为0.24-0.5T，所述细胞培养皿B处的磁感应强度为0.14-0.24T。

6.根据权利要求5所述的采用调节肝细胞ROS水平的磁场发生装置在调节酒精诱导肝细胞氧化应激水平中的应用，其特征在于，包括以下步骤：

S1、分别将两份8×10⁴肝细胞HL7702接种于两个35mm细胞培养皿中，待细胞完全贴壁，再分别加入340mM乙醇-培养基混合溶液，分别得到细胞培养皿A和细胞培养皿B，将细胞培养皿A和细胞培养皿B从下到上叠加放置于磁板正上方，进行磁性处理24小时；

S2、免疫荧光检测细胞内ROS：实验处理24小时后，加入0.25%胰酶消化，使用10uMDCFH-DA试剂于37℃孵育细胞30分钟，根据荧光显示结果分析细胞内ROS水平。