[发明专利]一种鉴定与鸭肌肉发育相关基因位点的方法

权利要求书

1.一种鉴定与鸭肌肉发育相关基因位点的方法，其特征是，包括以下步骤：

（1）提取胸肌率不同的鸭胸肌的RNA，反转录为cDNA，设计CDS区引物，通过混池测序找到的鸭MYOZ2基因SNP位点；检出位点为Exon4 A107G与Exon 4 A113T；

（2）从鸭血样中提取鸭基因组DNA，以所述待测鸭基因组DNA为模板，用扩增鸭MYOZ2基因SNP位点附近序列的正向引物和反向引物进行PCR扩增，得到PCR产物。

2.根据权利要求1所述的一种鉴定与鸭肌肉发育相关基因位点的方法，其特征是，步骤（1）中，设计CDS区引物时，根据NCBI数据库中MYOZ2基因的CDS区设计引物，具体如下：

正向引物序列见SEQ ID NO.1，反向引物序列见SEQ ID NO.2；

其中，SEQ ID NO.1为5’-CTGCACAACAAAACAGTAGGCA -3’；

SEQ ID NO.2为5’-ATGCCAGAGAAGAGACATTACAT -3’。

3.根据权利要求1所述的一种鉴定与鸭肌肉发育相关基因位点的方法，其特征是，步骤（2）中，采用酚抽提法从鸭血样中提取鸭基因组DNA。

4.根据权利要求1所述的一种鉴定与鸭肌肉发育相关基因位点的方法，其特征是，步骤（2）中，具体包括以下步骤：

a.引物设计与合成；

在NCBI网站查找MYOZ2基因序列，针对经过PCR测序方法筛选到的5'侧翼区SNP位点，设计正向引物序列、反向引物序列，正向引物序列见SEQ ID NO.3，反向引物序列见SEQ IDNO.4，扩增包含该SNP位点的核苷酸序列，如序列表SEQ ID NO.5所示；

其中，SEQ ID NO.3为5’- TCATTTTTTGCCTGTGCTA-3’；

SEQ ID NO.4为5’-GTTATCTGACTCAATTTATGTATTTCTA -3’；

SEQ ID NO.5为TCAATGATATTTATTTCTGTTTGAATGCAGCGTGGAGAGCCCATGCAGGGTGTTAAAATGGATGGCCTCAGTGTTGAAGGAATTCCCCAGCATGCCCCAATGACACCTCCTAACACACCTGATCCCCGAAGCCCACCACATCCAGACAACATTGCCCCAGGTAATAGATGAATTTATAGACATGGAATGCATTTATTACCCATCTCACAGCAGACGAAGGAGCTCTTTATAAAACAATGTCATTAACAATAATTTATTAATGGAGTTACTAT；

按照正向引物序列和反向引物序列，合成引物，将合成的引物稀释为10 u mol/L 浓度备用；

b.制备PCR扩增产物；

PCR扩增体系使用20 ul反应体系，2×PCR Mix用量为PCR扩增反应体系体积的一半即10ul，100 ng所述待检测鸭基因组DNA， 10 u mol/L正向、反向引物量，最后用dd H₂O补充至20 ul，混匀，即得PCR扩增反应体系；

将PCR扩增反应体系在94-95℃预变性3-5min；进行如下循环30-36个：94-95℃预变性20-40s，50-65℃退火20-40s，72℃延伸30s；最后再72℃延伸5-10min，即得到PCR产物。

5.根据权利要求1所述的一种鉴定与鸭肌肉发育相关基因位点的方法，其特征是，还包括步骤（3），对PCR产物进行测序。