[发明专利]一种鉴定与鸭肌肉发育相关基因位点的方法

说明书

本发明涉及一种鉴定与鸭肌肉发育相关基因位点的方法，包括以下步骤：（1）提取胸肌率不同的鸭胸肌的RNA，反转录为cDNA，设计CDS区引物，通过混池测序找到的鸭MYOZ2基因SNP位点；检出位点为Exon4 A107G与Exon 4 A113T；（2）从鸭血样中提取鸭基因组DNA，以所述待测鸭基因组DNA为模板，用扩增鸭MYOZ2基因SNP位点附近序列的正向引物和反向引物进行PCR扩增，得到PCR产物。本发明方法先进科学，通过本发明提供的一种鉴定与鸭肌肉发育相关基因位点的方法，采用聚合酶链式反应（PCR）及PCR产物测序的方法来检测基因型，根据基因型进行鸭的选育，可以提高鸭的生长速度，加快鸭的选育进程。

技术领域

本发明涉及一种鉴定与鸭肌肉发育相关基因位点的方法，属于鸭遗传(分子)标记辅助选择技术领域。

背景技术

我国是鸭肉生产、消费、出口第一大国，2020年中国商品肉鸭出栏量达到了46.83亿只，总产值1132.86亿元。鸭肉作为一种价格合理的优质蛋白来源，具有高蛋白低脂肪等特点，广受消费者青睐。为了提升鸭肉的产量和质量，对鸭肌肉发育相关基因的研究就显得尤为关键。目前在其他动物上筛选出的对肌肉发育有影响的基因主要分布于IGF家族，IGFBP家族，FOXO家族，MYOZ家族等。

MYOZ2基因编码钙调磷酸酶肌小节结合蛋白2(myozenin2，MYOZ2)，是在肌肉中表达的一种结构蛋白，它可以作为细胞内结合蛋白，参与连接Z线蛋白和将钙调神经磷酸酶信号传导到肌小节。Ahmad等人曾对蛋白结构做过推测，发现MYOZ2的结构中含有ɑ螺旋和多个磷酸化位点(Ahmad F et al.Identification and characterization of a novel gene(C4orf5)located on human chromosome 4q with specific expression in cardiacandskeletal muscle[J].Genomics,2000,70(3):347-354)，所以推测MYOZ2可能具有调节酶活性以及信号传导的功能。在先前的研究中也证实了MYOZ2可以抑制TAPC(Titin-cap，TCAP)的表达量从而对肌肉发育产生影响(吴怡琦等.MYOZ2通过负调控TCAP的表达抑制C3H10T1/2细胞成脂分化[J].中国生物化学与分子生物学报:1-15[2021-03-10])。TCAP是一种在心肌和骨骼肌中高度表达的肌丝蛋白，与心肌病、肌营养不良、肌肉萎缩等多种肌肉组织方面的疾病密切相关。吴俊静等人通过利用STRING数据库构建了MYOZ2的蛋白互作网络，发现MYOZ2可以通过多条通路影响肌肉分化，进而对家畜的肌肉品质产生直接影响(吴俊静等.肉质相关基因TCAP启动子与转录因子MyoD结合的ChIP分析[J].湖北农业科学,2013)。

Ivandic等人曾建立小鼠MYOZ2基因敲除模型，和同类小鼠模型相比均表现出心肌功能的显著变化。Norbert等人通过在小鼠后肢进行原位杂交发现MYOZ2的表达在腓肠肌中比较丰富，且随着个体的成长，在心肌中的表达量会减少(Frey N et al,Calsarcins,anovel family of sarcomeric calcineurin-binding proteins[J].Proceedings of theNational Academy of Sciences of the United States of America,2000,97(26):14632-7)。Gontier等人的研究显示MYOZ2可以与多种纤维蛋白相互作用形成融合蛋白，与肌膜上的肌糖蛋白和营养不良聚糖复合物相关(Gontier等，The Z-disc proteinsmyotilin and FATZ-1interact with each other and are connected to thesarcolemma via muscle-specific filamins.2005)。Bottje等人通过对比不同饲料转化率的鸡胸肌转录组发现，体内MYOZ2在高饲料转化率鸡的胸肌中更活跃，并以此介导某些生物学途径并导致这些鸟类的肌肉重塑。所以我们推测该基因对肌肉发育有着较大影响。