[发明专利]一种用于检测新冠病毒N蛋白的双抗体夹心ELISA试剂盒

权利要求书

1.一对适用于新冠病毒N蛋白检测的ELISA试剂盒制备的单克隆抗体，其特征在于通过如下方法获得：

免疫原制备：原核表达和真核表达的SARS-CoV-2病毒N蛋白纯化并经过60℃热处理30分钟与弗氏完全佐剂、弗氏不完全佐剂混合，制备免疫原，交叉免疫小鼠；

阳性杂交瘤细胞制备:取免疫鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合，以真核表达且热处理后SARS-CoV-2病毒N蛋白为阳性抗原正筛选，真核表达且经过热处理的SARS病毒N蛋白为阴性抗原负筛选间接ELISA筛选得阳性杂交瘤细胞；

单克隆抗体:阳性杂交瘤细胞亚克隆建株，腹水制备、纯化，即得22株单克隆抗体，对所述22株单克隆抗体进行生物素标记；

夹心抗体配对:对所述22株单克隆抗体进行包被抗体与酶标抗体配对筛选，即得适用于检测新冠病毒的双抗体夹心ELISA方法的包被抗体64360A#4:27、酶标抗体64360A#5:42。

2.权利要求1所述的包被抗体64360A#4:27，其组成为包括：

(a)轻链可变区

(i)包含SEQ ID NO：01所示氨基酸序列的CDR1区。

(ii)包含SEQ ID NO：02所示氨基酸序列的CDR2区。

(iii)包含SEQ ID NO：03所示氨基酸序列的CDR3区。

(b)重链可变区

(i)包含SEQ ID NO：04所示氨基酸序列的CDR1区。

(ii)包含SEQ ID NO：05所示氨基酸序列的CDR2区。

(iii)包含SEQ ID NO：06所示氨基酸序列的CDR3区。

3.权利要求1所述的检测抗体64360A#5:42，其组成为包括：

(a)轻链可变区

(i)包含SEQ ID NO：07所示氨基酸序列的CDR1区。

(ii)包含SEQ ID NO：08所示氨基酸序列的CDR2区。

(iii)包含SEQ ID NO：09所示氨基酸序列的CDR3区。

(b)重链可变区

(i)包含SEQ ID NO：10所示氨基酸序列的CDR1区。

(ii)包含SEQ ID NO：11所示氨基酸序列的CDR2区。

(iii)包含SEQ ID NO：12所示氨基酸序列的CDR3区。

4.权利要求1所述的ELISA检测试剂盒方法，其特征在于，所述包被抗体为64360A#4:27，包被浓度为5μg/mL-1μg/mL，最适包被浓度为1μg/mL。

5.权利要求1所述的ELISA检测试剂盒方法，其特征在于，所述检测抗体64360A#5:42为经过辣根过氧化物酶或生物素标记的，辣根过氧化物酶(HRP)标记后的稀释比例为1:5000至1:20000，优选1:10000稀释，生物素标记后的稀释比例为1:5000至1:20000，优选1:5000稀释。

6.权利要求1所述的ELISA检测试剂盒方法，其特征在于最低检测限为100pg/mL。

7.权利要求6所述的ELISA检测试剂盒可用于新冠病毒SARS-CoV-2的N蛋白的检测，并且与SARS病毒无交叉反应。