[发明专利]一种检测肝肠胞虫的RPA引物、探针、试剂盒及方法

权利要求书

1.一种检测肝肠胞虫的RPA引物和探针，其特征在于，所述RPA引物序列如SEQ ID NO.1～2所示，探针序列如SEQ ID NO.3所示，探针序列第31位胸腺嘧啶T的标记物为FAM，第32位胞嘧啶C由THF替换，第34位胸腺嘧啶T标记物为BHQ1，3’端进行C3Spacer修饰。

2.权利要求1所述引物和探针在制备检测肝肠胞虫的试剂或试剂盒中的应用。

3.一种检测肝肠胞虫的RPA试剂盒，其特征在于，包含权利要求1所述RPA引物和探针。

4.根据权利要求3所述RPA试剂盒，其特征在于，还包含RPA检测所需试剂。

5.一种非诊断目的的检测肝肠胞虫的Real-time RPA方法，其特征在于，包含以下步骤：

S1.提取待测样本DNA；

S2.以步骤S1所得DNA为模板，用权利要求1所述引物和探针进行RPA反应；

S3.结果判定，若出现扩增曲线则表明待测样本中存在肝肠胞虫，反之为阴性结果。

6.根据权利要求5所述方法，其特征在于，步骤S1中样本若为虾苗则取甲壳下组织提取DNA，若为大虾则取肝胰腺。

7.根据权利要求5所述方法，其特征在于，步骤S2所述RPA反应体系为20 μL，包含各0.84 μL的正、反向引物，0.24 μL的探针，11.8 μL的缓冲液，0.8 μL的模板，加水补至19 μL，混匀后加入相应冻干酶粉，最后加入1.0 μL的启动剂MgAc。

8.根据权利要求5所述方法，其特征在于，步骤S2所述RPA反应条件为37℃ 30s一个循环，共计40个循环。