[发明专利]一种基于量子点荧光微球探针检测氯霉素的方法

权利要求书

1.一种基于量子点荧光微球探针检测氯霉素的方法，其特征在于，步骤如下：

(1)制备羧基化Mn-ZnS量子点荧光纳米微球；所述羧基化Mn-ZnS量子点荧光纳米微球直径为4±0.5nm；

(2)利用步骤(1)制备的羧基化Mn-ZnS量子点荧光纳米微球加入氯霉素单克隆抗体，制备Mn-ZnS量子点纳米微球-氯霉素荧光探针；

(3)利用氯霉素-牛血清白蛋白偶联物制备检测线T线，利用羊抗鼠二抗制备质控线C线，喷涂在硝酸纤维素膜上，由在硬垫板上依次搭接并粘贴玻璃纤维样品垫、设置有T线和C线的硝酸纤维素膜和吸水垫组装起来获得层析试纸层；再剪成4-5毫米宽的试纸条；

(4)分别将步骤(2)所得的纳米微球-氯霉素荧光探针5-7微升与待测样品加入到酶标板孔中；于37℃烘箱内孵育20-25min后，即得D液；

(5)向步骤(4)的含有D液的酶标板孔中插入步骤(3)制备的层析试纸条，玻璃纤维样品垫一端浸入到酶标板孔中的液体中，待液体开始向硝酸纤维素膜层析时开始计时，4-5min后置于紫外分析仪下观察，通过T线颜色变化进行定量判断。

2.根据权利要求1所述的一种基于量子点荧光微球探针检测氯霉素的方法，其特征在于：步骤(1)所述羧基化Mn-ZnS量子点荧光纳米微球，由以下步骤的方法制得：

将ZnSO₄、MnCl₂和谷胱甘肽溶于超纯水中，用0.01mol/L的NaOH调节溶液pH值为11，通入氮气条件下磁力搅拌30-40min后加入Na₂S溶液，继续搅拌20-30min后，将温度升至55-60℃时停止通入氮气，继续反应2-4小时；ZnSO₄、MnCl₂和谷胱甘肽的摩尔比为2.5：0.1：4-6；MnCl₂与Na₂S的摩尔比为1：24-26；MnCl₂与超纯水的摩尔体积比为0.01：45-55(mmol：mL)；

反应结束后，加入等体积的乙醇使合成的量子点沉淀，在10000-12000rpm转速下离心分离，去除液体，获得产物，产物用去离子水洗涤大于等于5次去除未反应的原料，产物在低温干燥后备用。

3.根据权利要求1所述的一种基于量子点荧光微球探针检测氯霉素的方法，其特征在于：步骤(2)所述制备的羧基化Mn-ZnS量子点荧光纳米微球和氯霉素单克隆抗体，制备Mn-ZnS量子点纳米微球-氯霉素荧光探针，由包括以下步骤的方法制得：

取Mn-ZnS量子点加入含有磷酸盐缓冲液的棕色小瓶中，加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐溶液和N-羟基琥珀酰亚胺溶液，充分混合后迅速将小瓶置于超声清洗器中超声30-40min，然后加入氯霉素单克隆抗体，室温条件下在磁力搅拌的作用下反应90-100min获得Mn-ZnS QDs-CAP偶联物的Mn-ZnS量子点纳米微球-氯霉素荧光探针，4℃保存备用；Mn-ZnS量子点、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐与N-羟基琥珀酰亚胺的质量比为4-6：18：15；Mn-ZnS量子点与磷酸盐缓冲液的质量体积比为0.5：1-1.5mg：mL；Mn-ZnS量子点与氯霉素单克隆抗体的质量比为9-11：1。