[发明专利]一种溶瘤病毒NDV-NRP1及其构建方法与应用

权利要求书

1.一种重组新城疫病毒，其特征在于，所述重组新城疫病毒含有如SEQ ID NO.1和SEQID NO.2所示的核苷酸序列。

2.根据权利要求1所述的重组新城疫病毒，其特征在于，所述重组新城疫病毒还含有P2A序列，以其作为Linker连接SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列。

3.根据权利要求1或2所述的重组新城疫病毒的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将同时含有SEQ ID NO.1所示的NRP1-scFv和SEQ ID NO.2所示的GT的目的片段与线性化的rLaSota载体PBRN-FL质粒进行同源重组；

(2)将步骤(1)中的同源重组产物转化感受态细胞；

(3)筛选阳性单克隆菌株；

(4)对步骤(3)中筛选得到的阳性单克隆菌株进行质粒提取；

(5)重组质粒转染BSR细胞；

(6)重组病毒的增殖；

(7)重组病毒的鉴定。

4.根据权利要求3所述的重组新城疫病毒的构建方法，其特征在于，所述步骤(1)中同时含有NRP1-scFv和GT的目的片段是以质粒PcDNA3.1-NRP1-scFv-GT为模板，SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.5为引物扩增得到的。

5.根据权利要求4所述的重组新城疫病毒的构建方法，其特征在于，所述步骤(1)中线性化的rLaSota载体PBRN-FL质粒是使用Pme I限制性内切酶体系酶切得到。

6.根据权利要求5所述的重组新城疫病毒的构建方法，其特征在于，所述步骤(1)中线性化的rLaSota载体PBRN-FL质粒与目的基因的DNA总质量之比为1:1到1:3。

7.根据权利要求6所述的重组新城疫病毒的构建方法，其特征在于，所述步骤(2)中感受态细胞为TransStbl3化学感受态细胞。

8.根据权利要求7所述的重组新城疫病毒的构建方法，其特征在于，所述步骤(6)中将质粒转染BSR细胞的培养液接种于9-11日龄SPF级鸡胚中进行病毒的扩增。

9.根据权利要求4-8中任一项所述的构建方法构建得到的重组新城疫病毒。

10.根据权利要求9所述的重组新城疫病毒在制备治疗恶性肿瘤药物中的应用。