[发明专利]一种基于酶联显色法检测乙酸根含量的方法及其应用

权利要求书

1.琥珀酰辅酶A: 乙酸CoA转移酶在乙酸根检测中的应用，其特征在于，所述琥珀酰辅酶A: 乙酸CoA转移酶采用基因工程手段获得，具体包括：通过从醋酸杆菌中克隆获得编码琥珀酰辅酶A: 乙酸CoA转移酶的基因，将上述基因与表达载体结合，导入宿主内表达即得。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述表达载体为病毒载体、质粒或人工染色体中的任意一种或多种。

3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述表达载体为质粒。

4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述表达载体为pET-30a质粒。

5.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述宿主包括细菌和真核细胞。

6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述宿主选自埃希氏大肠杆菌、芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、酿酒酵母、里氏木霉和草酸青霉。

7.如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述埃希氏大肠杆菌为大肠杆菌Rosetta。

8.一种基于酶联显色法检测乙酸根的产品，其特征在于，所述产品至少包括琥珀酰辅酶A: 乙酸CoA转移酶、琥珀酰辅酶A和酰基辅酶A氧化酶；

所述产品还包括用于检测H₂O₂的产品。

9.如权利要求8所述的产品，其特征在于，所述用于检测H₂O₂的产品为基于分光光度法的过氧化氢含量检测试剂盒。

10.如权利要求8所述产品，其特征在于，所述基于酶联显色法检测乙酸根的产品为检测试剂盒。

11.如权利要求10所述产品，其特征在于，所述检测试剂盒包括试剂A和试剂B；

其中，所述试剂A包括aarC、succinyl-CoA、4-APP、MgCl₂、NaCl、KCl和Tris-HCl缓冲液；

所述试剂B包括TOOS、POD、ACOD、Triton X-100和Tris-HCl缓冲液；

所述检测试剂盒还包括标准品。

12.一种基于酶联显色法检测乙酸根含量的方法，其特征在于，所述方法包括采用权利要求8-11任一项所述基于酶联显色法检测乙酸根的产品进行检测。

13.如权利要求12所述方法，其特征在于，所述检测方法包括：

向待测样品中加入琥珀酰辅酶A: 乙酸CoA转移酶、琥珀酰辅酶A和酰基辅酶A氧化酶，产生H₂O₂，通过对H₂O₂进行检测进而间接测定乙酸根含量。

14.如权利要求 13所述方法，其特征在于，所述对H₂O₂进行检测采用基于分光光度法的过氧化氢含量检测试剂盒进行检测。

15.权利要求8-11任一项所述产品或权利要求12-14任一项所述方法在乙酸根检测中的应用。

16.如权利要求15所述应用，其特征在于，所述应用领域包括食品、轻纺、塑料、医疗、橡胶、染料、油漆领域。

17.如权利要求16所述应用，其特征在于，所述食品包括葡萄酒、果汁、醋、啤酒、硬质干酪、蛋黄酱或酸奶。

18.如权利要求15所述应用，其特征在于，当待测物为固体时，需要将固体样品在蒸馏水中进行粉碎、匀浆操作，使固体样品最终呈现液态后进行测定。

19.如权利要求18所述应用，其特征在于，将制备得到的匀浆液进行过滤后再进行测定。