[发明专利]一种基于酶联显色法检测乙酸根含量的方法及其应用

说明书

本发明提供一种基于酶联显色法检测乙酸根含量的方法及其应用，属于化合物检测技术领域。本发明通过研究发现，琥珀酰辅酶A:乙酸CoA转移酶可以将琥珀酰辅酶A和乙酸根作为底物，形成乙酰辅酶A和琥珀酸，后续将乙酰辅酶A在酰基辅酶A氧化酶作用下氧化，从而生成烯酰基辅酶A和H₂O₂。继而利用过氧化氢(H₂O₂)含量检测试剂盒测定H₂O₂，从而间接测定出乙酸含量，该方法检测灵敏度较高，同时检测成本低，具有良好的实际应用之价值。

技术领域

本发明属于化合物检测技术领域，具体涉及一种基于酶联显色法检测乙酸根含量的方法及其应用。

背景技术

公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

乙酸是大宗化工产品，是重要的有机酸之一，主要可用于生产乙酸乙烯、乙酸酐、乙酸酯和乙酸纤维素等，是农药、医药、织物印染、合成纤维的重要原料之一。如聚乙酸乙烯酯可用来制备薄膜和粘合剂，也是合成纤维维纶的原料。乙酸还可用来合成乙酐、丙二酸二乙酯、乙酰乙酸乙酯、卤代乙酸等，可制造药物如阿司匹林、还可以用于生产乙酸盐等。乙酸还是优良的有机溶剂，在化工、轻纺、塑料、医疗、橡胶、染料以及油漆工业等众多领域有着广泛的应用。

在食品工业中，乙酸可用作酸化剂，增香剂和香料。用水将乙酸稀释至4-5％浓度，再添加各种调味剂，可制成食用醋。作为酸味剂，乙酸存在于罐头、冷饮(如葡萄酒、果汁、酸奶、啤酒等)、糖果、焙烤食品、硬质干酪、布丁类、胶媒糖、调味品等。在生物实验中，实验所用生物样品中多含乙酸。此外，乙酸还具有防腐剂的作用。

在上述应用过程中，需要对乙酸进行含量检测，从而监测并控制乙酸含量。目前，常用的乙酸根测定方法通常选用离子色谱仪等进行离子检测，虽然具有测量准确等优点，但离子色谱仪等设备价格高昂，难以大规模推广使用。

发明内容

针对现有技术存在的不足，本发明提供一种基于酶联显色法检测乙酸根含量的方法及其应用。本发明通过研究发现，琥珀酰辅酶A:乙酸CoA转移酶可以将琥珀酰辅酶A和乙酸根作为底物，形成乙酰辅酶A和琥珀酸，后续将乙酰辅酶A在酰基辅酶A氧化酶作用下氧化，从而生成烯酰基辅酶A和H₂O₂。继而利用过氧化氢(H₂O₂)含量检测试剂盒测定H₂O₂，从而间接测定出乙酸含量，该方法检测灵敏度较高，同时极大降低检测成本，具有良好的实际应用之价值。

具体的，本发明涉及以下技术方案：

本发明的第一个方面，提供琥珀酰辅酶A:乙酸CoA转移酶在乙酸根检测中的应用。

在本发明的一个具体实施方式中，所述琥珀酰辅酶A:乙酸CoA转移酶可以采用基因工程手段获得，具体包括：通过从醋酸杆菌中克隆获得编码琥珀酰辅酶A:乙酸CoA转移酶的基因，将上述基因与表达载体结合，导入宿主内表达即得。

本发明的第二个方面，提供一种基于酶联显色法检测乙酸根的产品，所述产品至少包括琥珀酰辅酶A:乙酸CoA转移酶、琥珀酰辅酶A和酰基辅酶A氧化酶。

所述产品还包括用于检测H₂O₂的产品；所述用于检测H₂O₂的产品可以使用现有已知产品，在本发明的一个具体实施方式中，所述用于检测H₂O₂的产品基于分光光度法的过氧化氢含量检测试剂盒。

上述基于酶联显色法检测乙酸根的产品可以是检测试剂盒。

本发明的第三个方面，提供一种基于酶联显色法检测乙酸根含量的方法，所述方法包括：