[发明专利]一种芬太尼代谢标志物的检测试剂盒及其检测方法和应用

权利要求书

1.一种芬太尼代谢标志物的检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒用于检测芬太尼代谢标志物ABCB C3435T、OPRM1 A118G两个基因的基因多态性，试剂盒包括如下组分：ABCB1 C3435T扩增引物、ABCB1 C3435T测序引物、OPRM1 A118G扩增引物、OPRM1 A118G测序引物和阳性对照。

2.根据权利要求1所述的芬太尼代谢标志物的检测试剂盒，其特征在于，所述ABCB1C3435T扩增引物如序列表SEQ ID NO:1～2所示。

3.根据权利要求1所述的芬太尼代谢标志物的检测试剂盒，其特征在于，所述OPRM1A118G扩增引物如序列表SEQ ID NO:3～4所示。

4.根据权利要求1所述的芬太尼代谢标志物的检测试剂盒，其特征在于，所述ABCB1C3435T测序引物如序列表SEQ ID NO:5所示，OPRM1 A118G测序引物如序列表SEQ ID NO:6所示。

5.根据权利要求1所述的芬太尼代谢标志物的检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒还包括血液样品直接PCR预混液和海藻糖。

6.根据权利要求5所述的芬太尼代谢标志物的检测试剂盒，其特征在于，所述的PCR预混液为Blood Direct PCR Master Mix。

7.根据权利要求1所述的芬太尼代谢标志物的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中各组分浓度为：ABCB(C3435T)前引物(0.2uM)，ABCB(C3435T)后引物(0.2uM)，OPRM1(A118G)前引物(0.25uM)，OPRM1(A118G)后引物(0.25uM)，PCR预混液(1×)，海藻糖(0.2％)。

8.根据权利要求1所述的芬太尼代谢标志物的检测试剂盒，其特征在于，所述阳性对照，包括浓度为20ng/ul的ABCB1 C3435T、OPRM1 A118G杂合型基因组DNA。

9.一种采用权利要求1～8任一项所述的芬太尼代谢标志物的检测试剂盒，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤：

a.将所述扩增反应液与4ul待测EDTA抗凝全血混合均匀进行PCR扩增；

b.将含链霉亲和素标记微珠的结合液与扩增产物进行混合；

c.加入洗涤缓冲液漂洗；

d.变性液处理得到单链产物；

e.加入洗涤缓冲液漂洗；

f.向每个测序管中加入测序酶和测序底物；

g.取一个8排管，自圆滑一端向平端依次加入dATP、dTTP、dGTP、dCTP、ABCB C3435T测序引物、OPRM1 A118G测序引物、ddTTP；

h.焦磷酸测序。

10.一种根据权利要求1所述的芬太尼代谢标志物的检测试剂盒的应用，其特征在于，所述检测试剂盒用于体外检测待测样本中的ABCB1 C3435T和OPRM1 A118G基因多态性。