[发明专利]一种载牛乳铁蛋白肽壳聚糖纳米粒及其制备方法和一种冻干粉

说明书

本发明提供了一种载牛乳铁蛋白肽壳聚糖纳米粒的制备及其制备方法和一种冻干粉，属于纳米材料技术领域。本发明将低分子量壳聚糖粉末溶于冰醋酸溶液中，调整溶液pH为3～5，得到低分子量壳聚糖溶液；将牛乳铁蛋白肽溶液加入到低分子量壳聚糖溶液中反应得到反应液A；将三聚磷酸钠溶液加入反应液A中继续反应至得到淡蓝色乳光分散液。本发明制备的载牛乳铁蛋白肽壳聚糖纳米粒具有良好的物理化学表征及体外抑菌作用，无细胞毒性，可作为一种有前途的抗微生物肽药物释放系统。

技术领域

本发明涉及纳米材料技术领域，尤其涉及一种载牛乳铁蛋白肽壳聚糖纳米粒及其制备方法和一种冻干粉。

背景技术

大多数多细胞生物产生的抗微生物肽(AMPs)可作为快速抵御入侵病原微生物的第一道防线，这使得多细胞生物能够在竞争环境中生存，而无需复杂的自适应免疫系统。AMPs由氨基酸组成，具有不同的大小和形状，通常带有净正电荷，并且具有两亲性结构。不同类别的AMPs的抗菌作用机制有所不同，但通常AMPs可与带负电荷的细菌膜直接相互作用，从而引起膜去极化。AMPs广泛存在于生物体中，近年来其在抗菌方面获得了相当大的关注，由于其具有复杂且多模式的抗菌作用，因此被认为是一种有前途的抗生素替代品。

牛乳铁蛋白(Bovine lactoferrin，BLF)是哺乳动物黏膜上皮细胞产生的一种糖蛋白，其含有703个氨基酸，相对分子质量为80kDa，主要存在于牛奶和体液中。牛乳铁蛋白肽(Bovine lactoferricin，BLfcin)是BLF经胃蛋白酶水解后产生的一种AMPs，BLfcin具有抗菌、抗真菌、抗病毒和免疫调节等生物学活性，与天然蛋白相比，BLfcin具有更高的抗菌活性，表明BLfcin是BLF的杀菌结构域。BLF及其衍生肽的优点是具有广泛的抗菌谱，且不会引起细菌耐药性，扩大了它在奶牛乳房炎治疗中作为抗生素替代品的应用潜力。

尽管AMPs具有许多生物学功能，但静脉给药或口服无法取得理想的效果，这很可能是由于静脉注射后AMPs被血清蛋白灭活或是口服后在胃肠道中被酶降解。近年来，纳米制剂作为AMPs的药物递送系统受到了广泛关注，这种药物包封和递送体系可以保护肽免于被血清蛋白降解、提供理想的表面特性、改善药物对靶组织的生物分布和选择性，以取得更好的治疗效果。Leng等人制备出的载BLfcin纳米胶囊通过破坏白色念球菌的细胞壁和细胞膜从而导致其死亡，同时该纳米胶囊还增强了上皮细胞对白色念珠菌的自然杀伤特性。Qi等人制备了一种加载牛乳铁蛋白肽的pH和热双敏感的纳米颗粒，该纳米颗粒表现出抗肿瘤和免疫细胞激活作用。BLfcin可以通过纳米颗粒传递到肿瘤部位，在溶酶体的酸性环境和微波辐射引起的热条件下立即从纳米颗粒释放，并随着损伤相关分子模式的释放最终诱导肿瘤凋亡。

但是目前，应用于奶牛乳房炎防治的AMPs-纳米复合制剂的开发仍然较少；将纳米粒直接冻干后不易溶解，且粒径变化大，不利于后续的研究，研究一种稳定性好、载药量高、可以预防奶牛乳房炎的纳米粒冻干制剂是目前亟待解决的问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种载牛乳铁蛋白肽壳聚糖纳米粒及其制备方法和一种冻干粉，本发明制备得到的纳米粒具有较高的生物相容性和体外抑菌活性，且载药量高，对于制备预防奶牛乳房炎制剂具有突出的贡献。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种载牛乳铁蛋白肽壳聚糖纳米粒的制备方法，包括以下步骤：

1)将低分子量壳聚糖溶于冰醋酸溶液中，调整溶液pH为3～5，得到低分子量壳聚糖溶液；

2)将牛乳铁蛋白肽加入到低分子量壳聚糖溶液中反应得到反应液A；

3)将三聚磷酸钠溶液加入反应液A中继续反应至得到淡蓝色乳光分散液。

进一步的，所述冰醋酸溶液的体积浓度为0.01～0.5％。

进一步的，所述低分子量壳聚糖溶液和三聚磷酸钠溶液的浓度独立的为0.5～2mg/mL。