[发明专利]一种鉴定AML患者骨髓中NK细胞耗竭的研究方法及其应用

权利要求书

1.一种鉴定AML患者骨髓中NK细胞耗竭的研究方法，其特征在于，所述方法为：

研究AML患者复发时骨髓中NK细胞的成熟度表型，并在确定所述NK细胞的成熟度后，基于受体标志物研究所述AML患者复发时抑制性受体在NK细胞上是否处于过度表达；接着，进一步通过研究所述AML患者复发后NK细胞的抗肿瘤功能变化、增殖能力以及转录组学分析，来鉴定AML患者骨髓中NK细胞的耗竭现象。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

步骤1，设置复发组、CR组和HC组，并收集各组中每例的骨髓采集物BM；其中，所述CR组为移植后AML完全缓解的患者，所述HC组为健康供者组；

步骤2，根据对所述复发组、所述CR组和所述HC组进行的NK细胞表型分析，研究AML复发患者NK细胞的耗竭表型；并根据所述耗竭表型，进一步研究所述AML复发患者NK细胞的抗肿瘤功能变化；

步骤3，分别与原代AML细胞共培养4小时、24小时和48小时，并用7-AAD和Annexin V标记，研究所述NK细胞对原代AML细胞的杀伤作用；

步骤4，通过组学分析，研究移植后所述AML复发患者NK细胞的耗竭表型。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，在所述步骤1中，所述复发组由至少15例HSCT后首次血液学复发的AML患者组成。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，在所述步骤2中，所述耗竭表型包括AML复发患者NK细胞的成熟和表型变化。

5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，在所述步骤2中，进行所述NK细胞表型分析时，所有NK细胞在血样中用抗CD3、抗CD56的组合进行标记；采用受体标志物，以研究所述AML患者复发时抑制性受体在NK细胞上是否处于过度表达。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述受体标志物为NKG2A。

7.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，在所述步骤3中，通过分析IFN-γ的产生、CD107a的表达以及对原代AML细胞的杀伤能力，来研究所述AML复发患者NK细胞的抗肿瘤功能变化。

8.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，在所述步骤3中，每一个培养体系中的E:T比为1:1。

9.一种鉴定AML患者骨髓中NK细胞耗竭的研究方法的应用，其特征在于，将上述权利要求1-8任意一项所述的方法，用于研究急性髓系白血病HSCT后复发患者骨髓NK细胞的耗竭。