[发明专利]一种鉴定AML患者骨髓中NK细胞耗竭的研究方法及其应用

说明书

本发明提供了一种鉴定AML患者骨髓中NK细胞耗竭的研究方法及其应用。其中，该方法为：研究AML患者复发时骨髓中NK细胞的成熟度表型，并在确定所述NK细胞的成熟度后，基于受体标志物研究所述AML患者复发时抑制性受体在NK细胞上是否处于过度表达；接着，进一步通过研究所述AML患者复发后NK细胞的抗肿瘤功能变化、增殖能力以及转录组学分析，来鉴定AML患者骨髓中NK细胞的耗竭现象。本发明提供的方法，首次为白血病引起的NK细胞耗竭，提供了系统地研究方法，并证实了HSCT后AML复发患者存在NK细胞耗竭现象，同时，NKG2A⁺NK细胞的高频率表达与复发风险相关。因此，本申请提供的研究方法，在研究和判断HSCT后AML患者NK细胞是否耗竭中具有巨大的应用价值。

技术领域

本发明属于细胞相关技术领域，特别是涉及一种鉴定移植后AML患者骨髓中NK细胞耗竭的研究方法及其应用。

背景技术

急性髓系白血病是一种恶性血液肿瘤，五年生存率仅为25％。虽然造血干细胞移植(HSCT)是作为治疗中/高危急性髓系白血病化疗后复发或耐药疾病患者的挽救治疗，提供最大的长期生存潜力。然而，高达30％的患者最终会因中危白血病而复发，而高危或难治性复发白血病的复发风险更高，因此复发仍然是HSCT治疗失败的主要原因。以往的研究已经观察到T细胞耗竭与HSCT后AML的复发率有关。然而该发现已不能满足当下技术人员对HSCT后AML是否复发的判断需求。

因此，本技术领域中，亟需一种帮助技术人员判断HSCT后AML是否复发的研究方法。

发明内容

为解决上述现有技术中存在的问题，本发明提供了一种鉴定AML患者骨髓中NK细胞耗竭的研究方法及其应用。该研究方法通过检测健康供者、AML患者和HSCT后AML复发患者的NK细胞表型、细胞毒性、增殖能力以及转录组学分析，以鉴定AML患者骨髓中是否存在NK细胞耗竭现象。具体内容如下：

第一方面，本发明提供了一种鉴定AML患者骨髓中NK细胞耗竭的研究方法，所述方法为：

研究AML患者复发时骨髓中NK细胞的成熟度表型，并在确定所述NK细胞的成熟度后，基于受体标志物研究所述AML患者复发时抑制性受体在NK细胞上是否处于过度表达；接着，进一步通过研究所述AML患者复发后NK细胞的抗肿瘤功能变化、增殖能力以及转录组学分析，来鉴定AML患者骨髓中NK细胞的耗竭现象。

优选地，所述方法包括以下步骤：

步骤1，设置复发组、CR组和HC组，并收集各组中每例的骨髓采集物BM；其中，所述CR组为移植后AML完全缓解的患者，所述HC组为健康供者组；

步骤2，根据对所述复发组、所述CR组和所述HC组进行的NK细胞表型分析，研究AML复发患者NK细胞的耗竭表型；并根据所述耗竭表型，进一步研究所述AML复发患者NK细胞的抗肿瘤功能变化；

步骤3，分别与原代AML细胞共培养4小时、24小时和48小时，并用7-AAD和AnnexinV标记，研究所述NK细胞对原代AML细胞的杀伤作用；

步骤4，通过组学分析，研究移植后所述AML复发患者NK细胞的耗竭表型。

优选地，在所述步骤1中，所述复发组由至少15例HSCT后首次血液学复发的AML患者组成。

优选地，在所述步骤2中，所述耗竭表型包括AML复发患者NK细胞的成熟和表型变化。

优选地，在所述步骤2中，进行所述NK细胞表型分析时，所有NK细胞在血样中用抗CD3、抗CD56的组合进行标记，采用受体标志物，以研究所述AML患者复发时抑制性受体在NK细胞上是否处于过度表达。

优选地，所述受体标志物为NKG2A。